甜菊糖苷中萊鮑迪A苷的研究.pdf

1、甜味劑對(duì)食品的感官品質(zhì)起非常重要的作用，為滿足現(xiàn)代生活對(duì)食品風(fēng)味、營(yíng)養(yǎng)、安全的要求，有必要研究新型的甜味劑。萊鮑迪A苷作為天然甜味劑甜菊糖苷中的主要成分，甜度高，余味小，是甜菊糖苷的高端產(chǎn)品，可被歐美國(guó)家認(rèn)可作為食品添加劑。本論文通過(guò)制備色譜制備得到了萊鮑迪A苷的高純產(chǎn)品，建立了萊鮑迪A苷的分析方法；摸索改進(jìn)和優(yōu)化了天然甜味劑萊鮑迪A苷的提取純化工藝；考察了提純所得的萊鮑迪A苷作為甜味劑對(duì)小鼠的毒性和血糖影響；研究了萊鮑迪A苷的甜味性質(zhì)

2、，并探索將萊鮑迪A苷替代蔗糖應(yīng)用于食品，考察其對(duì)食品品質(zhì)的影響。
　　 首先用高效液相制備色譜制備萊鮑迪A苷的高純產(chǎn)品，探討了分離甜菊糖苷中萊鮑迪A苷的高效液相色譜條件，在制備條件(采用LichrospherNH210mmX250mm制備柱，以乙腈水(35+65，v/v)溶液為流動(dòng)相，4mL/min流速，進(jìn)樣量200μL）下制備得到了相對(duì)純度為99％的高純樣品，通過(guò)樣品的質(zhì)譜、核磁共振、紅外、紫外圖譜的綜合分析及與資料報(bào)導(dǎo)數(shù)據(jù)的

3、比對(duì)，確認(rèn)高純樣品為萊鮑迪A苷。在此基礎(chǔ)上建立了檢測(cè)甜菊糖苷混合物中萊鮑迪A含量的HPLC方法，在萊鮑迪A苷量在3～100μg范圍之間呈良好的線性關(guān)系，用于甜菊糖苷提取物中萊鮑迪A苷的檢測(cè)，測(cè)定的RSD為2.78％，回收率在91.97％～98.42％之間。
　　 為了工業(yè)化提純?nèi)R鮑迪A苷，有必要改進(jìn)甜菊糖苷的加工質(zhì)量控制方法。為此，建立了甜菊總苷測(cè)定的紫外快速方法，在4～100μg/mL范圍之內(nèi)，總苷標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度與紫外205n

4、m下的吸光度之間呈良好的線性關(guān)系，相應(yīng)的線性回歸方程為Y=0.0095+7.9623X(R=0.9994，n=9)，方法的RSD在1.40～2.38％之間，測(cè)定甜葉菊提取物中總糖苷，回收率在95.9％～100.2％之間，與容量法（GB2870第二法，工廠質(zhì)量控制方法）相比快速、簡(jiǎn)便，穩(wěn)定性、精密度、準(zhǔn)確度良好。
　　 摸索改進(jìn)了萊鮑迪A苷的提取方法。以甜葉菊為原料，通過(guò)超聲波輔助提取法與傳統(tǒng)水浴浸提法進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果表明：超聲波輔

5、助提取法不僅可以縮短時(shí)間，而且甜菊糖苷的得率提高，尤其是提取液中萊鮑迪A苷含量相對(duì)提高。故提取甜菊糖苷時(shí)，超聲波提取法優(yōu)于傳統(tǒng)水浴浸提法。通過(guò)響應(yīng)面分析得到超聲提取甜菊糖苷最佳的工藝條件為：提取溫度68℃，超聲功率60W，提取時(shí)間32min。
　　 以甜菊糖苷混合物為原料，摸索純化萊鮑迪A苷的方法。采用重結(jié)晶法一次純化得到萊鮑迪A苷的相對(duì)純度93％（總苷含量95％）的產(chǎn)品，結(jié)晶產(chǎn)率60.7g/100g。重結(jié)晶的條件：以甲醇+異丙

6、醇(99：1)復(fù)合溶劑作重結(jié)晶溶劑、固液比(W/V)1:8，在-10℃保溫放置48h。通過(guò)因素實(shí)驗(yàn)得到溶劑選擇是提高結(jié)晶萊鮑迪A苷純度的關(guān)鍵。結(jié)晶溫度和時(shí)間、溶劑固液比、是否加入晶種是提高結(jié)晶產(chǎn)率的影響因素。多次重結(jié)晶純化得到萊鮑迪A苷的相對(duì)純度大于95.8％的產(chǎn)品，但結(jié)晶產(chǎn)率明顯降低。
　　 采用改良Karber法研究了萊鮑迪A苷對(duì)于小鼠的急性毒性，測(cè)得萊鮑迪A苷對(duì)小鼠的口服急性毒性LD50為22284mg/kg，可認(rèn)為萊鮑迪

7、A苷基本無(wú)毒；亞急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示萊鮑迪A苷對(duì)小鼠的體重、臟器重量、臟器指數(shù)沒(méi)有直接影響。小鼠的餐后血糖反應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示攝入萊鮑迪A苷30min時(shí)血糖值出現(xiàn)峰值，較攝入葡萄糖慢了15min，并且較攝入相當(dāng)量葡萄糖的血糖峰值略低。同時(shí)，構(gòu)建四氧嘧啶型糖尿病小鼠模型與正常小鼠對(duì)照，經(jīng)連續(xù)10天灌胃萊鮑迪A苷溶液，測(cè)得正常小鼠空腹血糖與灌胃生理鹽水的空白小鼠相比無(wú)顯著性差異，四氧嘧啶型糖尿病模型組小鼠空腹血糖與灌胃生理鹽水的四氧嘧啶型糖尿病

8、模型對(duì)照小鼠相比也無(wú)顯著性差異，證明萊鮑迪A苷對(duì)小鼠空腹血糖基本沒(méi)有影響。
　　 對(duì)采用重結(jié)晶法從甜菊糖苷混合物中提純獲得萊鮑迪A苷(93％)產(chǎn)品的甜味性質(zhì)進(jìn)行研究，萊鮑迪A苷(93％)的甜度是2％蔗糖溶液的400倍以上，但甜味不如蔗糖持久、甜味圓潤(rùn)質(zhì)感差，高濃度有余味，隨萊鮑迪A苷濃度降低，余味效果變好。與相應(yīng)濃度的甜菊糖苷混合物（萊鮑迪A苷60％）對(duì)比，甜度提高了40％以上，余味明顯減小，甜味味質(zhì)有了明顯的改善和提高。萊鮑迪

9、A苷(93％)的相對(duì)甜度經(jīng)驗(yàn)公式為RS=482.10-24.95×ES。在等甜2％蔗糖濃度時(shí)，在品嘗溫度4℃下相對(duì)甜度可達(dá)540倍。萊鮑迪A苷溶液的相對(duì)甜度隨pH變化而變化，在pH6.0時(shí)相對(duì)甜度最低。pH相同，萊鮑迪A苷溶液的相對(duì)甜度隨酸種類的變化而變化，蘋(píng)果酸會(huì)提高相對(duì)甜度，而酒石酸降低相對(duì)甜度。
　　 采用HPLC測(cè)定各溶液萊鮑迪A苷含量和測(cè)定相對(duì)甜度的方法進(jìn)行了萊鮑迪A苷溶液的熱、酸、光穩(wěn)定性的研究。萊鮑迪A苷(pH7)

10、溶液在100℃水浴條件下煮沸60min，相對(duì)甜度沒(méi)有發(fā)生變化，萊鮑迪A苷的含量基本不變，可認(rèn)為萊鮑迪A苷溶液的熱穩(wěn)定性良好。但萊鮑迪A苷(pH4)溶液在100℃水浴條件下煮沸60min，相對(duì)甜度下降，萊鮑迪A苷保留率60min時(shí)下降5.2％，說(shuō)明在一定的酸度下加熱，萊鮑迪A苷會(huì)降解。萊鮑迪A苷(pH7.0)的溶液暴露在陽(yáng)光下1周、2周、3周、4周后相對(duì)甜度沒(méi)有發(fā)生變化，萊鮑迪A苷的含量不變，說(shuō)明光對(duì)萊鮑迪A苷溶液的穩(wěn)定性的影響很小。

11、r>　　 最后，將萊鮑迪A苷替代部分蔗糖應(yīng)用于三類典型食品：固體、半固體、液體。用萊鮑迪A苷替代部分蔗糖配制的果味飲料，隨蔗糖替代度的升高，果味飲料的粘稠度、可溶性固形物降低，感官評(píng)定結(jié)果，蔗糖替代度以20％最好。用萊鮑迪A苷替代部分蔗糖制備的冰淇淋，隨蔗糖替代度的升高，總固形物逐漸降低，膨脹率基本不變，感官評(píng)定結(jié)果，蔗糖替代度以20％最好。用萊鮑迪A苷替代部分蔗糖制備的面包測(cè)定結(jié)果，隨蔗糖替代度的升高，面包的水分含量基本不變，面包的