LATS1基因去甲基化對(duì)人肝癌細(xì)胞Hippo-YAP信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的：通過去甲基化藥物上調(diào)LATS1基因在人肝癌細(xì)胞中的表達(dá)，研究LATS1基因?qū)θ烁伟┘?xì)胞增殖、凋亡、裸鼠成瘤及Hippo信號(hào)通路的影響。
　　方法：利用蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測(cè)人肝癌細(xì)胞HepG2與SMMC-7721中大腫瘤抑制基因-1（Large tumor suppressor gene1，LATS1）和下游癌基因Yes-相關(guān)蛋白（Yes-associated protein, YAP）的蛋白表達(dá)水平

2、，使用甲基化特異性 PCR（Methylation-specific PCR, MSP）與亞硫酸氫鹽測(cè)序法（Bisulfite sequencing PCR，BSP）檢測(cè)HepG2與SMMC-7721細(xì)胞中LATS1基因的甲基化水平，利用5-氮雜-2脫氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine, DAC)去甲基化處理 HepG2與SMMC-7721細(xì)胞后，用MSP和Western Blot分別檢測(cè)LATS1的甲基化水平與LAT

3、S1和YAP的蛋白表達(dá)水平，流式細(xì)胞術(shù)（Flow cytometry, FCM）檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡和周期情況，建立細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型，檢測(cè)各組細(xì)胞成瘤情況。
　　結(jié)果： MSP顯示人肝癌細(xì)胞系HepG2與SMMC-7721中LATS1存在高度甲基化；BSP定量顯示HepG2細(xì)胞中LATS1甲基化程度（甲基化的 CPG島位點(diǎn)占全部CPG島位點(diǎn)的比例）為92.4%，SMMC-7721細(xì)胞中LATS1甲基化程度為93.1%，LATS1

4、基因啟動(dòng)子區(qū)域高度甲基化；WB提示LTAS1低表達(dá)，YAP高表達(dá)（P＜0.05）。經(jīng) DAC去甲基化處理 HepG2與SMMC-7721，MSP顯示LATS1的甲基化水平顯著降低（P＜0.05）,同時(shí)LAST1蛋白表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05），但YAP蛋白表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05），細(xì)胞周期停滯在 G1期（P＜0.05）、細(xì)胞凋亡率顯著增加（P＜0.05）、裸鼠皮下移植瘤大小與體積顯著減小（P＜0.05）。
　　結(jié)論：