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文檔簡介
1、真菌毒素是真菌生長過程中產生的次級代謝產物,廣泛存在于食品及飼料中,嚴重危害人和動物的健康。因此,建立快速靈敏的真菌毒素檢測方法對于食品和飼料的安全監(jiān)管具有重要的意義。免疫學檢測方法基于抗原抗體的特異性結合,靈敏度高且簡單易操作。本研究建立了適于真菌毒素的免疫學快速檢測方法。由于ELISA方法具有檢測時間短、前處理簡單、低成本、高靈敏度等優(yōu)點,具有廣泛的應用前景,本課題建立了適用于黃曲霉毒素B1(AFB1)的高靈敏ELISA檢測方法;由
2、于等離子共振傳感器有免標記,實時監(jiān)測,高靈敏等優(yōu)點,建立了適于黃曲霉毒素B1定量檢測的等離子共振傳感器方法;此外,為了獲得理想的檢測結果,制備了玉米赤霉烯酮免疫親和柱,該免疫親和柱可作為有效的樣品前處理凈化手段,結合其他檢測方法可實現玉米赤霉烯酮高靈敏檢測。
1、通過基質輔助激光解離飛行時間質譜對合成偶聯產物AFB1-BSA進行鑒定,監(jiān)控其是否制備成功;該抗原用于ELISA檢測中,測得AFB1單抗的效價為1:8000,建立的間
3、接競爭ELISA實驗方法IC50值為0.224 ng/mL,該抗體對AFB1結構類似物有較高的交叉反應,適用于檢測黃曲霉毒素類物質;應用此抗體建立間接競爭ELISA方法,對加標花生樣品進行測定,回收率為103.45-132.29%,變異系數為0.74-9.07%,與LC-MS/MS驗證試驗測定結果相一致。
2、優(yōu)化了金膜表面自組裝單層膜形成條件(裸金片浸泡溫度及時間)、抗原進樣流速、耦合緩沖液、抗原濃度、反應緩沖液、抗體反應濃
4、度和洗脫條件等參數,確定了等離子共振傳感器定量檢測黃曲霉毒素B1的最佳條件:金片浸泡于4℃、1 mM的巰基十一烷酸乙醇溶液中12 h,抗原進樣流速為20μL/min,耦合緩沖液為離子濃度10 mM,pH4.5的醋酸鈉緩沖液,抗原濃度為30μg/mL,固定時間為12.5 min;反應緩沖液為HBS緩沖液,抗體濃度為15μg/mL,反應時間為15 min,流速為20μL/min。該方法對AFB1的最低檢測限為0.312 ng/mL,線性范圍
5、是0.625-10 ng/mL。與AFB2、AFG1、AFG2和AFM1的交叉反應率分別為72%、33%、43%和48%,表明此方法除了可檢測AFB1外,還可用于黃曲霉毒素總量的檢測。
3、對制備的玉米赤霉烯酮免疫親和柱的性能進行評價。該免疫親和柱對ZEN的平均柱容量為580 ng/0.3 mL凝膠;柱空白為0;1 mL甲醇可以將添加標準品洗脫95%以上;連續(xù)使用5次后柱容量將下降到初始柱容量的50%。該免疫親和柱對其它五種玉
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