等離子共振傳感器定量檢測黃曲霉毒素B1的研究和玉米赤霉烯酮免疫親和柱的評價.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩72頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、真菌毒素是真菌生長過程中產生的次級代謝產物,廣泛存在于食品及飼料中,嚴重危害人和動物的健康。因此,建立快速靈敏的真菌毒素檢測方法對于食品和飼料的安全監(jiān)管具有重要的意義。免疫學檢測方法基于抗原抗體的特異性結合,靈敏度高且簡單易操作。本研究建立了適于真菌毒素的免疫學快速檢測方法。由于ELISA方法具有檢測時間短、前處理簡單、低成本、高靈敏度等優(yōu)點,具有廣泛的應用前景,本課題建立了適用于黃曲霉毒素B1(AFB1)的高靈敏ELISA檢測方法;由

2、于等離子共振傳感器有免標記,實時監(jiān)測,高靈敏等優(yōu)點,建立了適于黃曲霉毒素B1定量檢測的等離子共振傳感器方法;此外,為了獲得理想的檢測結果,制備了玉米赤霉烯酮免疫親和柱,該免疫親和柱可作為有效的樣品前處理凈化手段,結合其他檢測方法可實現玉米赤霉烯酮高靈敏檢測。
  1、通過基質輔助激光解離飛行時間質譜對合成偶聯產物AFB1-BSA進行鑒定,監(jiān)控其是否制備成功;該抗原用于ELISA檢測中,測得AFB1單抗的效價為1:8000,建立的間

3、接競爭ELISA實驗方法IC50值為0.224 ng/mL,該抗體對AFB1結構類似物有較高的交叉反應,適用于檢測黃曲霉毒素類物質;應用此抗體建立間接競爭ELISA方法,對加標花生樣品進行測定,回收率為103.45-132.29%,變異系數為0.74-9.07%,與LC-MS/MS驗證試驗測定結果相一致。
  2、優(yōu)化了金膜表面自組裝單層膜形成條件(裸金片浸泡溫度及時間)、抗原進樣流速、耦合緩沖液、抗原濃度、反應緩沖液、抗體反應濃

4、度和洗脫條件等參數,確定了等離子共振傳感器定量檢測黃曲霉毒素B1的最佳條件:金片浸泡于4℃、1 mM的巰基十一烷酸乙醇溶液中12 h,抗原進樣流速為20μL/min,耦合緩沖液為離子濃度10 mM,pH4.5的醋酸鈉緩沖液,抗原濃度為30μg/mL,固定時間為12.5 min;反應緩沖液為HBS緩沖液,抗體濃度為15μg/mL,反應時間為15 min,流速為20μL/min。該方法對AFB1的最低檢測限為0.312 ng/mL,線性范圍

5、是0.625-10 ng/mL。與AFB2、AFG1、AFG2和AFM1的交叉反應率分別為72%、33%、43%和48%,表明此方法除了可檢測AFB1外,還可用于黃曲霉毒素總量的檢測。
  3、對制備的玉米赤霉烯酮免疫親和柱的性能進行評價。該免疫親和柱對ZEN的平均柱容量為580 ng/0.3 mL凝膠;柱空白為0;1 mL甲醇可以將添加標準品洗脫95%以上;連續(xù)使用5次后柱容量將下降到初始柱容量的50%。該免疫親和柱對其它五種玉

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論