Nell-1對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞在鈦片表面成骨分化作用的影響及機(jī)制探討.pdf

1、目的：
　　Nell-1是一個(gè)與顱縫早閉相關(guān)的新型分泌蛋白。作為一個(gè)可能的生長(zhǎng)因子，與骨軟骨世系有高度特異性，在包括嚙齒類和其他大型動(dòng)物的多種機(jī)體模型中對(duì)骨發(fā)育有全面的誘導(dǎo)作用。本實(shí)驗(yàn)通過觀察鈦片上前成骨細(xì)胞MC3T3-E1的生長(zhǎng)狀態(tài)，研究不同濃度Nell-1對(duì)前成骨細(xì)胞增殖、分化及成骨的影響，并從中篩選出最佳濃度；探討其可能機(jī)制是否通過激活MAPK/ERK信號(hào)通路。
　　方法：
　?、艑⑶俺晒羌?xì)胞MC3T3-E1接種

2、于鈦片，體外進(jìn)行復(fù)合培養(yǎng)，采用掃描電鏡觀察前成骨細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。將實(shí)驗(yàn)分成5個(gè)組，即4個(gè)Nell-1實(shí)驗(yàn)組（1ng/ml、10 ng/ml、100 ng/ml、500 ng/ml）和空白對(duì)照組（未加Nell-1組）。CCK8法檢測(cè)Nell-1對(duì)前成骨細(xì)胞增殖活力的影響；ALP活性試劑盒檢測(cè)ALP的活性；ELISA法檢測(cè)OCN的分泌水平；Western-Blot法檢測(cè)RUNX2、OPG和COL-1的蛋白表達(dá)情況；qRT-PCR法檢測(cè)ALP

3、、OCN、RUNX2、OPG、COL-I和OSX的基因表達(dá)情況。篩選Nell-1促成骨分化的最佳濃度。⑵Western-Blot法觀察Nell-1對(duì)前成骨細(xì)胞在鈦片表面ERK、JNK和P38的蛋白磷酸化水平。采用通路抑制劑U0126抑制ERK信號(hào)通路。ELISA法檢測(cè)OCN的分泌水平；Western-Blot法檢測(cè)ERK的蛋白磷酸化水平以及RUNX2和OPG的蛋白表達(dá)情況；qRT-PCR法檢測(cè)OCN、RUNX2、OPG和OSX的基因表達(dá)

4、情況。
　　結(jié)果：
　?、賿呙桦婄R觀察見前成骨細(xì)胞在鈦片表面生長(zhǎng)良好。②Nell-1實(shí)驗(yàn)組的增殖活力基本低于對(duì)照組（P＜0.05）。③Nell-1促進(jìn)前成骨細(xì)胞在鈦片表面的ALP活性，上調(diào)了OCN、RUNX2、COL-I和OPG的蛋白表達(dá)水平以及ALP、OCN、RUNX2、COL-I、OPG和OSX的基因表達(dá)水平(P＜0.05)。其中Nell-1濃度為100ng/ml時(shí)成骨分化效果最佳。④在MAPK通路中，Nell-1在鈦片

5、表面促進(jìn)前成骨細(xì)胞ERK和JNK的蛋白磷酸化水平（P＜0.05），對(duì)P38的蛋白磷酸化水平無明顯影響（P＞0.05）。⑤ERK抑制劑U0126下調(diào)了Nell-1對(duì)前成骨細(xì)胞在鈦片表面OCN、RUNX2和OPG的蛋白表達(dá)水平以及OCN、RUNX2、OPG和OSX的基因表達(dá)水平（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　⑴Nell-1抑制前成骨細(xì)胞的增殖，但能有效促進(jìn)前成骨細(xì)胞在鈦片表面成骨分化的作用，且濃度為100ng/ml的作用效果