1,3-甘油二酯乳脂制備及其體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)途徑初探.pdf

1、乳脂是一種富含多種不飽和脂肪酸的油脂，其脂肪酸多以甘油三酯形態(tài)存在，過(guò)多的攝入甘油三酯會(huì)對(duì)人體健康有不利影響，容易引起高血壓等一系列心腦血管疾病?，F(xiàn)有研究表明，含有一定比例1,3-甘油二酯(1,3-DAG)的混合油脂，具有降血脂的功能作用。本文在建立一種高效液相方法檢測(cè)乳脂中1,3甘油二酯含量的基礎(chǔ)上，開(kāi)發(fā)了一種在無(wú)溶劑體系下使用諾維信435酶（Novozyme435）催化乳脂甘油解反應(yīng)，制備富含1,3-甘油二酯改性乳脂的工藝。通過(guò)Ca

2、co-2細(xì)胞模型對(duì)改性乳脂在小腸吸收路徑中相關(guān)代謝基因表達(dá)的影響進(jìn)行探究，為改性乳脂產(chǎn)品功能性做出驗(yàn)證。
　　建立了一種檢測(cè)混合酯中1,3-甘油二酯含量的檢測(cè)方法。通過(guò)高效液相（HPLC）色譜串聯(lián)示差檢測(cè)器對(duì)乳脂中1,3-甘油二酯進(jìn)行分離檢測(cè)，結(jié)果表明，流動(dòng)相采用正己烷/異丙醇/甲酸（20:3:1），進(jìn)樣體積10uL，色譜柱柱溫35℃，歷時(shí)28min，可有效分離樣品中不同甘油酯。通過(guò)面積歸一化法進(jìn)行定量，方法重現(xiàn)性試驗(yàn)RSD在0.

3、468％~1.462%之間，穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD小于2%，回收率97.4%~101.3%之間。此方法高效、準(zhǔn)確，適合用于富含1,3-甘油二酯混合酯的檢測(cè)分析。
　　開(kāi)發(fā)了一種在無(wú)溶劑體系下使用Novozyme435催化乳脂甘油解反應(yīng)制備富含1,3-甘油二酯改性乳脂的工藝。從三種脂肪酶中選取Novozyme435作為催化劑，考察反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、酶添加量以及甘油乳脂摩爾比四種因素對(duì)1,3-甘油二酯得率的影響。單因素試驗(yàn)結(jié)果采用Box-

4、Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行優(yōu)化并驗(yàn)證，獲得最佳工藝參數(shù)為：在反應(yīng)時(shí)間12.2h、酶添加量為6%，反應(yīng)溫度為54.6℃，醇油摩爾比3.6：1，甘油解反應(yīng)后的乳脂產(chǎn)物中1,3-甘油二酯的含量可達(dá)48.72%。改性后的乳脂相關(guān)理化指標(biāo)均符合國(guó)家相關(guān)質(zhì)量和衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。
　　通過(guò)Caco-2細(xì)胞模型，考察富含1,3-甘油二酯的乳脂在腸道內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中對(duì)相關(guān)基因表達(dá)的影響。穩(wěn)定性試驗(yàn)顯示改性前后的乳脂消化液能在12h內(nèi)穩(wěn)定存在于細(xì)胞培養(yǎng)液中。MT

5、T細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)顯示改性乳脂消化液對(duì)Caco-2細(xì)胞的IC50值為1560?M，普通乳脂消化液的IC50值為1617?M，細(xì)胞試驗(yàn)控制在安全劑量水平下實(shí)施。21日齡細(xì)胞添加普通乳脂消化液（TAG）、改性乳脂消化液（DAG）、空白培養(yǎng)液（CK）在6孔板中共同培養(yǎng)4h后，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)脂類小腸轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因（FABP1、MTP、DGAT1、PPARα）的表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示，DAG組和TAG組都能顯著上調(diào)四種基因的表達(dá)，DAG