MiR-106b在ATD致粒細(xì)胞缺乏發(fā)生中的作用及機(jī)制.pdf

1、第一部分 MiR-106b對(duì)粒細(xì)胞細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響
　　目的：觀察miR-106b的表達(dá)水平變化對(duì)人早幼粒白血病細(xì)胞株(HL-60)細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。
　　方法：采用miR-106b的類似物miR-106b mimic（高表達(dá)組），抑制物miR-106b inhibitor（低表達(dá)組）及miR-106b control（對(duì)照組）轉(zhuǎn)染HL-60細(xì)胞，qRT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞miR-106b表達(dá)變化。分別于轉(zhuǎn)染后第24

2、 h、48 h、72 h收集細(xì)胞，MTT比色法檢測(cè)三個(gè)組細(xì)胞增殖情況，流式細(xì)胞儀結(jié)合 AnnexinV/PI雙染色檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率。
　　結(jié)果：qRT-PCR檢測(cè)高表達(dá)組、低表達(dá)組、對(duì)照組miR-106b的表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)：低表達(dá)組miR-106b表達(dá)量在48 h、72 h分別是對(duì)照組的0.53和0.45倍（P<0.05），高表達(dá)組miR-106b表達(dá)量是對(duì)照組的1.52和1.56倍（P<0.05）。MiR-106b inhibito

3、r轉(zhuǎn)染HL-60細(xì)胞48 h、72 h后，細(xì)胞增殖較對(duì)照組明顯被抑制（P＜0.05），而高表達(dá)組、對(duì)照組及正常組三組間細(xì)胞增殖狀況無(wú)明顯差異。同時(shí)miR-106b低表達(dá)組較對(duì)照組HL-60細(xì)胞凋亡明顯增加（P＜0.05）。
　　結(jié)論：MiR-106b低表達(dá)可抑制粒細(xì)胞增殖，促進(jìn)其凋亡。
　　第二部分 MiR-106b調(diào)控粒細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究
　　目的：研究miR-106b調(diào)控HL-60細(xì)胞凋亡的靶向調(diào)控基因及其作用的細(xì)

4、胞內(nèi)信號(hào)通路。
　　方法：通過(guò)在線核酸數(shù)據(jù)庫(kù)（Genebank）檢索獲取miR-106b的成熟序列，預(yù)測(cè)與細(xì)胞凋亡信號(hào)通路密切相關(guān)的靶向基因及其3’非編碼區(qū)結(jié)合位點(diǎn)（3’UTR）、預(yù)測(cè) miR-106b與靶基因結(jié)合自由能等生物信息。通過(guò)構(gòu)建雙熒光素酶報(bào)告基因載體，進(jìn)行熒光素酶實(shí)驗(yàn)鑒定檢測(cè)軟件預(yù)測(cè)的靶基因。運(yùn)用RT-PCR和Western blot檢測(cè)實(shí)驗(yàn)各組預(yù)測(cè)靶基因mRNA及蛋白的表達(dá)變化。并采用Western blot檢測(cè)靶蛋

5、白的下游調(diào)控蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：在成功獲取miR-106b成熟序列和PTEN3’UTR序列基礎(chǔ)上，通過(guò)在線軟件分析證實(shí)miR-106b與PTEN有理想的相互作用位點(diǎn)及較低的結(jié)合自由能。miR-106b mimic與野生型psiCHECK?-2-PTEN-WT3’UTR共轉(zhuǎn)染后抑制熒光素酶活性，而突變型psiCHECK?-2-PTEN-Mut3’UTR共轉(zhuǎn)染后熒光素酶活性無(wú)明顯變化。與對(duì)照組相比較，RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)抑制