抗重金屬鋅單克隆抗體的制備.pdf

1、農(nóng)畜產(chǎn)品中殘留的重金屬離子已對(duì)人類安全構(gòu)成嚴(yán)重威脅，急需快速、高效的重金屬殘留檢測方法。重金屬離子免疫檢測是一種新型的檢測方法，與傳統(tǒng)檢測方法相比，具有省時(shí)、省力、費(fèi)用低廉、便于攜帶、易于操作等優(yōu)點(diǎn)。重金屬離子的免疫檢測有多克隆抗體免疫檢測和單克隆抗體免疫檢測，主要的檢測手段包括熒光偏振免疫檢測、間接競爭性ELISA、一步法競爭性免疫檢測和KinExA儀器檢測。 本論文的研究目的是合成并鑒定重金屬鋅螯合物抗原、制備重金屬鋅螯合物

2、抗原特異性的單克隆抗體，為建立快速檢測方法奠定基礎(chǔ)。 本論文以鋅離子通過雙功能團(tuán)金屬螯合劑DTPA與KLH的偶聯(lián)物作為免疫原免疫BALB/c鼠，采用雜交瘤技術(shù)建立抗重金屬鋅單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。通過BALB/c鼠體內(nèi)收集腹水和體外擴(kuò)增法大量制備單克隆抗體，經(jīng)鹽析、親和層析獲得純化的單克隆抗體。 本研究獲得了以下主要研究結(jié)果： 1．利用BCA法檢測得分離純化后的Zn-DTPA-OVA、Zn-DTPA-KLH、D

3、TPA-OVA、DTPA-KLH中蛋白實(shí)際濃度依次為：25．155±0．038、4．195±0．014、9．242±0．015、6．609±0．025 mg/mL，并發(fā)現(xiàn)當(dāng)A液中含有Zn2+物質(zhì)的量是B液中含有DTPA物質(zhì)的量的5倍時(shí)是其最佳反應(yīng)條件，而螯合劑物質(zhì)的量與蛋白中賴氨酸物質(zhì)的量的比例為2：1。 2．通過石墨爐原子吸收光譜法檢測得Zn-DTPA-OVA和Zn-DTPA-KLH中全Zn的含量依次為：295．0±0．3、4