Ad-hBMP-2基因轉(zhuǎn)染骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞體外成骨分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、　　目的：
　　1.探討骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞體外分離培養(yǎng)、鑒定的方法,研究骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的生物學(xué)特性,為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。
　　2.評(píng)價(jià)腺病毒介導(dǎo)的人骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(Ad-hBMP-2)基因體外轉(zhuǎn)染骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞后,肌衛(wèi)星細(xì)胞分化為成骨樣細(xì)胞的能力；并測(cè)定基因轉(zhuǎn)染后目的基因體外表達(dá)的情況。應(yīng)用Ad-GFP基因轉(zhuǎn)染肌衛(wèi)星細(xì)胞,測(cè)定腺病毒轉(zhuǎn)染的效率。為應(yīng)用骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞修復(fù)骨缺損提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.采用

2、Ⅰ型膠原酶和胰蛋白酶二步消化法獲取大鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞,進(jìn)行體外原代和傳代培養(yǎng)。觀察細(xì)胞的形態(tài),通過(guò)生長(zhǎng)曲線、細(xì)胞融合率等指標(biāo)研究骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖與分化能力,利用免疫細(xì)胞化學(xué)染色對(duì)所獲得的細(xì)胞進(jìn)行鑒定。
　　2.Ad-hBMP-2基因體外轉(zhuǎn)染骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞后,通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察、生長(zhǎng)曲線的測(cè)定、堿性磷酸酶(ALP)細(xì)胞化學(xué)染色及活性檢測(cè)、骨鈣素(OC)及Ⅰ型膠原的免疫細(xì)胞化學(xué)染色、礦化結(jié)節(jié)形成實(shí)驗(yàn)和Western—blot,觀察Ad