骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞體外培養(yǎng)及谷氨酰胺對(duì)其作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過研究體外培養(yǎng)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的方法，為研究骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞與運(yùn)動(dòng)性骨骼肌損傷提供試驗(yàn)材料，探討谷氨酰胺對(duì)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的作用。 方法：用Ⅳ型膠原酶和胰蛋白酶兩步酶消化法分離、獲取大鼠腓腸肌衛(wèi)星細(xì)胞。細(xì)胞純化后，在不同條件培養(yǎng)液中培養(yǎng)。每天在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長、分化情況。用骨骼肌肌動(dòng)蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞。用MTT法繪制傳代細(xì)胞的生長曲線。將谷氨酰胺加入培養(yǎng)液中，用MTT法測(cè)定細(xì)胞光吸收值，觀察谷

2、氨酰胺對(duì)衛(wèi)星細(xì)胞生長的作用。 結(jié)果：酶消化法獲取的骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞經(jīng)差速貼壁法純化后，細(xì)胞純度在95％以上。細(xì)胞在生長培養(yǎng)基中，以分裂、增殖為主；在分化培養(yǎng)基中，細(xì)胞融合，形成肌管。骨骼肌肌動(dòng)蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)染色后，肌衛(wèi)星細(xì)胞胞漿呈弱陽性，肌管呈強(qiáng)陽性。傳代細(xì)胞增殖速度快，第3-5天為對(duì)數(shù)生長期。與空白對(duì)照組比較，培養(yǎng)液中加入不同濃度谷氨酰胺后，衛(wèi)星細(xì)胞的光吸收值升高，但在最大濃度組表現(xiàn)為光吸收值降低；隨觀察時(shí)間延長，細(xì)胞經(jīng)相同濃

3、度谷氨酰胺作用后，光吸收值呈逐漸升高。 結(jié)論：1、使用兩步酶消化法分離、差速貼壁法純化的原代骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞成活率較高，亦可避免成纖維細(xì)胞的污染，從而得到高純度的衛(wèi)星細(xì)胞。2、將原代骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞接種于經(jīng)鼠尾膠原預(yù)先處理的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，可提高原代骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的成活率。3、提高培養(yǎng)基中血清濃度，細(xì)胞表現(xiàn)為增殖而抑制分化，血清濃度越高，衛(wèi)星細(xì)胞的增殖能力也越強(qiáng)；降低血清濃度則可促進(jìn)衛(wèi)星細(xì)胞分化而形成肌管。細(xì)胞密度對(duì)衛(wèi)星細(xì)胞的培養(yǎng)也有很重