犬IFN-α基因的克隆、表達及其生物學活性的研究.pdf

1、干擾素(IFN)作為細胞因子超家族中的一員，是一類由特定誘生劑作用于細胞分泌的具有一定抗病毒、抗腫瘤以及免疫調節(jié)功能等活性的糖蛋白，分為I和Ⅱ兩個型。Ⅰ型IFN包括a、β、ω等亞型，而Ⅱ型IFN則只有γ一個型。其中，IFN-a由于具有廣譜的抗病毒活性以及一定的免疫調節(jié)功能而逐漸成為研究的熱點．IFN-a主要由白細胞產生，與IFN-β，IFN-ω作用于同一受體，能抑制病毒DNA和蛋白質合成，促進MHC I類分子提呈抗原。 目前，犬

2、病毒性疾病在全球范圍內呈現出越來越嚴重的趨勢，在對這些病毒病的防治中，由于還沒有犬干擾素的產品問世，都是使用人干擾素來代替犬干擾素。自Himmler等人于1987年首先開始了犬a-干擾素基因的研究以來，一些國外學者利于大腸桿菌或桿狀病毒等表達系統(tǒng)表達出了犬a-干擾素基因，并對其生物學活性進行了初步探討，而國內則只有王艷等在大腸桿菌與巴斯德畢赤酵母中對犬a-干擾素基因1亞型進行了表達，還未見犬a-干擾素抗犬病毒性疾病方面的研究報道。

3、 本實驗通過RT-PCR方法從畢格犬外周血淋巴細胞中克隆出了犬的a-擾素基因1亞型，將PCR產物連接至pGEM-Teasy載體，挑取酶切鑒定陽性質粒進行測序，測序結果表明此次克隆的犬a-擾素基因1亞型同與GenBank上所發(fā)表的登錄號為m28624的序列同源性為100％。然后把該基因克隆進桿狀病毒轉移載體pFastBacI，在桿狀病毒表達系統(tǒng)中對其進行了表達，將sf9細胞感染的P3代毒的培養(yǎng)上清通過VSV-CEF檢測系統(tǒng)檢測證實獲得了