高致病性鍺繁殖與呼吸綜合征病毒TJM-F92疫苗株毒力返強(qiáng)及其對(duì)其他疫苗株的免疫干擾研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的一種以母豬繁殖障礙、仔豬和育肥豬呼吸道疾病為主要特征的傳染病，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了巨大經(jīng)濟(jì)損失。免疫疫苗是控制PRRS的有效方法。一般情況下滅活疫苗具有良好的安全性，但不能提

2、供有效保護(hù)。PRRSV活疫苗可刺激機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫與體液免疫應(yīng)答，但活疫苗存在毒力返強(qiáng)的風(fēng)險(xiǎn)，并且由于PRRSV具有免疫抑制作用，通過(guò)傳統(tǒng)方法制備的PRRSV活疫苗一般很難改變其免疫抑制性，接種此類活疫苗會(huì)對(duì)機(jī)體造成免疫抑制，并且會(huì)干擾同期免疫的其他活疫苗的免疫應(yīng)答。
　　高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒TJM-F92疫苗株(HP-PRRSV TJM-F92)是一株在Nsp2基因存在不連續(xù)30個(gè)氨基酸(aa)缺失的同時(shí)還存在一段連續(xù)

3、缺失120個(gè)aa的弱毒疫苗株。本研究通過(guò)將PRRSV TJM-F92株基礎(chǔ)種子接種PRRS健康易感仔豬，連續(xù)在豬體內(nèi)傳代五代來(lái)驗(yàn)證該疫苗株是否存在毒力返強(qiáng)風(fēng)險(xiǎn)。并開(kāi)展了PRRSV TJM-F92株對(duì)豬瘟兔化弱毒株(CSFV C株)及偽狂犬Bartha-K61疫苗株（PRV Bartha-K61株）的免疫干擾研究。
　　將PRRSV TJM-F92株基礎(chǔ)種子免疫接種PRRS抗原、抗體陰性健康易感豬，采集病毒血癥載毒高峰期（接種病毒后

4、第5日～第9日）的血清樣品，繼代接種易感豬進(jìn)行5代毒力返強(qiáng)試驗(yàn)，并對(duì)返強(qiáng)第5代分離病毒進(jìn)行Nsp2基因序列分析，檢驗(yàn)PRRSVTJM-F92株的安全性及Nsp2基因存在的120個(gè)aa在易感動(dòng)物體內(nèi)的穩(wěn)定性。試驗(yàn)結(jié)果表明，每代易感豬均未見(jiàn)臨床異常。大體剖檢結(jié)果顯示，免疫組與對(duì)照組試驗(yàn)豬肺臟、脾臟、腎臟、肝臟、心臟、扁桃體和淋巴結(jié)眼觀無(wú)明顯變化。對(duì)肺臟進(jìn)行病理組織學(xué)檢測(cè)，結(jié)果顯示，肺泡結(jié)構(gòu)正常、清晰，支細(xì)管周圍有少量淋巴細(xì)胞，免疫組與對(duì)照組

5、無(wú)差異，未見(jiàn)由間質(zhì)性肺炎引起的損傷。將PRRSV TJM F92經(jīng)豬體內(nèi)連續(xù)傳代五代后，在TJM-F92株Nsp2區(qū)域存在的120個(gè)氨基酸的缺失仍然存在，說(shuō)明該缺失可在豬體內(nèi)穩(wěn)定遺傳。試驗(yàn)結(jié)果表明PRRSV TJM-F92疫苗株無(wú)毒力返強(qiáng)風(fēng)險(xiǎn)。
　　本研究通過(guò)開(kāi)展高劑量PRRSV TJM-F92株對(duì)低劑量CSFV C株或低劑量PRV Bartha-K61株同時(shí)免疫與間隔免疫干擾研究，高致病性豬繁殖與呼吸綜合征、偽狂犬二聯(lián)活疫苗對(duì)豬

6、的免疫學(xué)功能影響試驗(yàn)，分別從體液免疫、細(xì)胞免疫、免疫攻毒及病理學(xué)變化等方面比較了毒種聯(lián)合免疫組、毒種間隔免疫組與各毒種單免組在免疫及攻毒后的各項(xiàng)免疫學(xué)指標(biāo)變化情況及攻毒保護(hù)情況。結(jié)果，高劑量PRRSV TJM-F92株對(duì)低劑量CSFV C株或低劑量PRV Bartha-K61株同時(shí)免疫、間隔7日免疫或間隔14日免疫，PRRSV TJM F92株對(duì)CSFV C株、PRV Bartha-K61株抗體水平無(wú)免疫干擾作用，與CSFV C株、PR

7、V Bartha-K61株單免組抗體水平無(wú)顯著差異。攻擊CSFV強(qiáng)毒或PRV強(qiáng)毒后，各毒種聯(lián)合免疫組、毒種間隔免疫組試驗(yàn)動(dòng)物在臨床癥狀、體溫、攻毒保護(hù)率、病理學(xué)變化等方面與各毒種單免組試驗(yàn)動(dòng)物無(wú)顯著差異，各免疫組仔豬全部建活并得到有效保護(hù)。對(duì)4～6周齡PRRS與PR健康易感仔豬免疫高致病性豬繁殖與呼吸綜合征、偽狂犬二聯(lián)活疫苗，通過(guò)流式細(xì)胞儀對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物外周淋巴血液中免疫細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)通過(guò)檢測(cè)抗體效價(jià)，統(tǒng)計(jì)攻毒保護(hù)率，進(jìn)行病理組織學(xué)檢測(cè)

8、，并與PRRSV單苗免疫組與PRV單苗免疫組進(jìn)行比較，結(jié)果表明，PRRSV+PRV二聯(lián)苗、PRV單苗組、PRRSV單苗組免疫仔豬后抗體產(chǎn)生情況良好，可刺激機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答，未引起T細(xì)胞比例降低，攻毒保護(hù)率均為5/5。上述試驗(yàn)結(jié)果表明，PRRSVTJM-F92株疫苗對(duì)CSFV C株或PRV Bartha-K61株等活疫苗毒株無(wú)免疫抑制作用。
　　綜上所述，PRRSV TJM-F92株不存在毒力返強(qiáng)風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)一步證明其為一株非常安全