遺傳性多發(fā)性骨軟骨瘤致病基因突變的分析.pdf

1、遺傳性多發(fā)性骨軟骨瘤(hereditary multiple osteochondroma)又稱遺傳性多發(fā)性外生骨疣(HME)，是骨骼系統(tǒng)常見(jiàn)的常染色體顯性遺傳病。本病以骨表面有軟骨帽的骨隆突形成為特征，常伴有關(guān)節(jié)疼痛、運(yùn)動(dòng)受限、長(zhǎng)骨形態(tài)異常、瘤體壓迫鄰近血管神經(jīng)等并發(fā)癥，并有一定幾率惡變成軟骨肉瘤(惡變率約0.5％-5％)。有研究表明HME具有遺傳異質(zhì)性，其發(fā)病機(jī)制與EXT基因突變有關(guān)。EXT基因家族主要由EXT1、EXT2、EXT3

2、和具有具有相同羧基端編碼產(chǎn)物的EXTL1、EXTL2及EXTL3所組成。EXT突變引起Ihh、Wnt、BMP等信號(hào)傳導(dǎo)通路異常，影響軟骨細(xì)胞增殖分化，從而導(dǎo)致骨軟骨瘤的形成。大量研究報(bào)道提示多數(shù)HME患者的致病基因與EXT1和EXT2有關(guān)，而與EXTL有關(guān)的基因突變尚未有在任何HME患者中發(fā)現(xiàn)。因此，除上述的EXT1和EXT2的基因突變外，是否在EXT基因存在的新的突變，仍待進(jìn)一步研究。
　　目的:通過(guò)PCR檢測(cè)技術(shù)，對(duì)1個(gè)遺傳性

3、多發(fā)性骨軟骨瘤家系進(jìn)行EXT1及EXT2的基因突變篩查，初步掌握PCR及測(cè)序等致病基因突變篩查的方法，以分析遺傳性多發(fā)性骨軟骨瘤發(fā)病機(jī)制中相關(guān)基因突變情況，并為進(jìn)一步分析突變基因所產(chǎn)生的功能變化提供依據(jù)。
　　方法:收集來(lái)自湖南婁底的一例遺傳性多發(fā)性骨軟骨瘤家系。該家系共4代，21人，患者7人。其中收集血液標(biāo)本3個(gè)，提取DNA并樣本濃度標(biāo)準(zhǔn)化后，使用primer3在線軟件設(shè)計(jì)引物，共設(shè)計(jì)20對(duì)引物，根據(jù)引物的設(shè)計(jì)參數(shù)，應(yīng)用PCR擴(kuò)

4、增EXT1及EXT2基因的熱點(diǎn)編碼區(qū)及外顯子側(cè)翼序列，再使用聚丙烯酰胺凝膠電泳對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行驗(yàn)證，最終對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行直接測(cè)序。通過(guò)DNA star軟件分析測(cè)序結(jié)果，將發(fā)現(xiàn)的變異在db SNP數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)分析以排除SNP位點(diǎn)。
　　結(jié)果:選擇對(duì)家系內(nèi)的患者(Ⅱ:3，Ⅲ:3，Ⅳ:2)針對(duì)遺傳性多發(fā)性骨軟骨瘤致病基因EXT1和EXT2進(jìn)行突變篩查。通過(guò)PCR及測(cè)序，EXT1熱點(diǎn)區(qū)域未發(fā)現(xiàn)任何變異;EXT2熱點(diǎn)區(qū)域中發(fā)現(xiàn)3個(gè)SNP位點(diǎn)(r