遺傳性多發(fā)性外生性骨疣家系致病基因的定位與突變分析.pdf

1、2003年,中國醫(yī)學遺傳學國家重點實驗室與中南大學湘雅二醫(yī)院合作,采集到一個遺傳性多發(fā)性外生性骨疣家系,該家系已遺傳了4代,表現(xiàn)為常染色體顯性遺傳,我們采集了家系中20個成員血樣,其中患者10人.為了得到該家系的致病基因,我們采取定位、侯選基因突變檢測的方法對該家系致病基因進行研究.首先,應用基因組掃描方法對該遺傳性多發(fā)性外生性骨疣家系疾病基因進行排除定位,我們利用8,11和19號染色體上的微衛(wèi)星標記進行基因分型,再對該家系進行連鎖分析

2、,在D11S4191和D11S935分別得到Lod值1.60和1.03,支持該家系致病基因與11p11-p13的EXT2連鎖,然后對該遺傳性多發(fā)性外生性骨疣家系的侯選基因EXT2基因進行突變檢測,PCR擴增EXT2基因的編碼區(qū)及外顯子與內(nèi)含子交界處,直接測序分析尋找突變,發(fā)現(xiàn)一個IVS2+1G→A(536+1G→A)雜合突變,對該家系所有樣本進行測序,發(fā)現(xiàn)該變異與疾病表型共分離,在50個家系外正常對照中未發(fā)現(xiàn)該變異.該突變不在編碼區(qū),是

3、一個剪接位點的改變.最后我們利用RT-PCR證實:該剪接位點的改變激活了EXT2外顯子2內(nèi)一個潛在的剪接供體位點,新的剪接發(fā)生在外顯子2的第315與316堿基之間,導致編碼區(qū)發(fā)生了從316-536共221個堿基的缺失.統(tǒng)計分析認為在EXT2基因的2和8號外顯子中包含有66％突變,而我室家系庫尚有15個外生性骨疣家系沒有找到突變,所以我們選取家系中的先證者,直接測序該基因的2和8號外顯子.結果我們在其中四個家系中一共找到了三個無義突變.其