免疫治療結束后腫瘤微環(huán)境中的IFN-γ撤除通過增強整合素αvβ3信號導致有潛力的腫瘤細胞侵襲轉移.pdf

1、華中科技大學博士學位論文免疫治療結束后腫瘤微環(huán)境中的IFNγ撤除通過增強整合素αvβ3信號導致有潛力的腫瘤細胞侵襲轉移姓名：龔偉申請學位級別：博士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：馮作化張桂梅20090501華中科技大學同濟醫(yī)學院博士畢業(yè)論文2（CH50多肽）補救，達到抑制腫瘤細胞生長和侵襲的作用。本實驗研究內容主要分為以下五部分：第一部分：研究腫瘤免疫治療后殘存腫瘤細胞的侵襲轉移能力。免疫治療并不能完全清除腫瘤細胞，而且我們不清楚殘

2、存腫瘤的侵襲轉移能力又發(fā)生什么改變？體內轉染41BBLsPD1質粒，RTPCR和Westernblot結果顯示，轉染48h后，小鼠肌肉注射部位均有41BBL和sPD1mRNA和蛋白質表達。體內轉染p41BBLpsPD1質粒進行基因治療，能夠顯著抑制小鼠腿部腫瘤生長，腫瘤生長速率顯著低于空白對照組和pcDNA3.1組。動物實驗結果表明，經(jīng)過p41BBLpsPD1質粒治療的腫瘤組織塊其肝移植瘤明顯大于空白對照組和pcDNA3.1組的肝移植瘤

3、，肝表面可見較多的轉移結節(jié)。第二部分：研究免疫治療結束后殘存的腫瘤細胞侵襲轉移能力的變化及其影響因素。IFNγ是腫瘤免疫治療中非常重要的細胞因子，IFNγ具有明顯抑制小鼠腿部腫瘤生長的作用。采用IFNγELISA試劑盒檢測，結果顯示p41BBLpsPD1組治療結束時和治療結束后14天IFNγ濃度降低10倍。IFNγ治療后的移植瘤停用IFNγ治療，肝移植瘤生長速度加快，瘤體明顯增大，而且肝表面可見多個轉移結節(jié)。體外經(jīng)IFNγ處理的B16細

4、胞和H22細胞分別接種于C57BL6和BALBc小鼠的肝臟，16天后解剖小鼠，IFNγ撤除組（接種IFNγ處理的瘤細胞后，動物不再進行免疫治療組），腫瘤生長明顯增強，瘤體明顯增大。第三部分：研究旨在觀察IFNγ處理和撤除后腫瘤細胞生物學特性的改變，并探討引起這些生物學特性改變可能的機制。IFNγ處理后濃度降低s速度與細胞體外增殖速度成正比。而且IFNγ撤除后B16細胞在抵抗MMC誘導凋亡、粘附以及恢復粘附能力、侵襲能力等方面均明顯高于對

5、照組細胞。同時應用RealTimePCR、westernblot檢測相關基因變化情況：與增殖、抵抗凋亡正相關的基因如cMyc、Bcl2和BclxL表達均明顯高于對照組細胞；而負相關基因如p21WAF1、p27Kip和Bax均明顯低于對照組細胞；Westernblot檢測ERK12、JNK磷酸化，IFNγ撤除后B16細胞的ERK12、JNK磷酸化水平增高。尾靜脈接種IFNγ處理B16細胞于小鼠，5、24小時小鼠肺部腫瘤熒光數(shù)目明顯高于對照