氧化型甘露聚糖修飾的肺癌A549腫瘤細(xì)胞抗原增強(qiáng)樹突狀細(xì)胞呈遞能力的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的
　　 1、應(yīng)用柱層析法,制備氧化型甘露聚糖化合物,用化學(xué)方法將其與腫瘤細(xì)胞抗原相連接,為下一步作為糖基化腫瘤細(xì)胞抗原致敏DC做好準(zhǔn)備。
　　 2、通過觀察糖基化抗原負(fù)載DC后的細(xì)胞形態(tài)、表型、細(xì)胞因子分泌以及誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞增殖情況,探討糖基化抗原對DC生物學(xué)功能的影響。
　　 3、通過檢測糖基化抗原負(fù)載DC后激活的CTL對腫瘤細(xì)胞的殺傷率的影響,評價(jià)DC負(fù)載糖基化抗原后誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫效果情況。
　　

2、 方法
　　 1、4%多聚甲醛分別固定肺癌A549細(xì)胞(fixedA549,f-A)和氧化型甘露聚糖修飾的肺癌A549細(xì)胞(ox-M-A)獲得兩組腫瘤細(xì)胞抗原,分別定義為對照組和實(shí)驗(yàn)組。
　　 2、取患者外周血分離單個核細(xì)胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC),聯(lián)合應(yīng)用重組人粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子、重組人白細(xì)胞介素-4和重組人腫瘤壞死因子-α,誘導(dǎo)其為成熟樹突狀細(xì)胞(matu

3、redendriticcells,mDC),使其分別負(fù)載兩組腫瘤細(xì)胞抗原。
　　 3、用倒置顯微鏡觀察實(shí)驗(yàn)組和對照組DC形態(tài)上的變化。
　　 4、用流式細(xì)胞術(shù)檢測實(shí)驗(yàn)組與對照組DC表面CD80、CD83、CD86及HLA-DR的免疫表型的變化。
　　 5、用ELISA法檢測實(shí)驗(yàn)組與對照組DC培養(yǎng)上清液中IL-12p70分泌水平。
　　 6、CCK8法檢測實(shí)驗(yàn)組與對照組DC激活CTL對腫瘤細(xì)胞的殺傷活性的改

4、變。
　　 結(jié)果
　　 1、獲得了氧化型甘露聚糖修飾的腫瘤細(xì)胞抗原的復(fù)合物,與未修飾組形成對比。
　　 2、倒置顯微鏡下觀察,實(shí)驗(yàn)組與對照組比較,實(shí)驗(yàn)組的DC細(xì)胞在細(xì)胞形態(tài)上有更多的樹突狀/偽足狀突起。
　　 3、流式細(xì)胞儀檢測實(shí)驗(yàn)組與對照組比較,DC表面CD80、CD83、CD86及HLA-DR的表達(dá)上調(diào)較明顯(76.48%vs24.90%,75.15%vs25.26%,80.20%vs31.80%,8

5、8.71%vs41.64%,P＜0.05)。
　　 4、用ELISA法檢測實(shí)驗(yàn)組與對照組DC培養(yǎng)上清液中IL-12p70分泌水平升高(41.15±2.31vs34.04±3.03,P＜0.05)。
　　 5、CCK8法檢測實(shí)驗(yàn)組與對照組比較,前者DC激活CTL對腫瘤細(xì)胞的殺傷活性更強(qiáng)(P＜0.05)。
　　 結(jié)論
　　 1、氧化型甘露聚糖修飾的肺癌A549腫瘤細(xì)胞抗原形成復(fù)合物后,可以增強(qiáng)DC細(xì)胞的抗原攝