人源肝癌單鏈抗體基因真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建、表達(dá).pdf

1、近年來，逐漸發(fā)展的抗體庫(kù)技術(shù)為制備高親和性的人源抗體提供了有力工具。單鏈抗體（ScFv）可以在預(yù)先并不知道細(xì)胞表面受體特征的情況下與腫瘤細(xì)胞特異性結(jié)合而獲得，ScFv蛋白具有分子小、穿透力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。我實(shí)驗(yàn)室利用噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)，構(gòu)建了全人源肝癌ScFv噬菌體庫(kù)，并篩選到了一株肝癌特異性ScFv基因，為了實(shí)現(xiàn)ScFv基因的功能性表達(dá)，為了進(jìn)一步鑒定ScFv蛋白的功能,我們利用篩選到的基因進(jìn)行蛋白的真核表達(dá)。
　　目的：構(gòu)建人源肝癌單

2、鏈抗體基因真核表達(dá)質(zhì)粒pSectag2B/ScFv并在中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（CHO細(xì)胞）中獲得表達(dá)，為人源肝癌ScFv蛋白的進(jìn)一步功能研究和臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
　　方法：我實(shí)驗(yàn)室篩選得到一株肝癌特異性ScFv基因，用PCR及核酸內(nèi)切酶技術(shù)將其克隆入真核表達(dá)質(zhì)粒pSectag2B，構(gòu)建重組質(zhì)粒pSectag2B/ScFv，測(cè)序鑒定后，電轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞，利用SDS－PAGE和Western blot技術(shù)檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)情況。
　　

3、結(jié)果：將750bp人源肝癌ScFv基因插入真核表達(dá)質(zhì)粒pSectag2B，經(jīng)DNA測(cè)序鑒定正確，成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pSectag2B/ScFv。將pSectag2B/ScFv轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞后獲得目的蛋白表達(dá)。SDS-PAGE和Western blot檢測(cè)結(jié)果表明目的蛋白Mr約為34000。
　　結(jié)論：成功構(gòu)建含人源肝癌ScFv基因重組質(zhì)粒pSectag2B/ScFv，并在CHO細(xì)胞中獲得表達(dá)，為人源肝癌ScFv的進(jìn)一步的應(yīng)用研究提