一個(gè)2N-3型血管性血友病家系的臨床和分子發(fā)病機(jī)制研究.pdf

1、目的：血管性血友?。╲on Willebrand disease, VWD）是最常見(jiàn)的遺傳性出血性疾病，是由于von Willebrand因子（VWF）先天性缺陷導(dǎo)致血漿中血管性血友病因子的量或質(zhì)異常所引起的。臨床多表現(xiàn)為皮膚、黏膜出血，或外傷后、拔牙、外科手術(shù)后出血不止，女性患者可表現(xiàn)為月經(jīng)出血量增多。血管性血友病可分為1型、2型和3型三個(gè)類(lèi)型，2N型血管性血友病是由于血管性血友病因子與凝血因子VIII（FⅧ）的結(jié)合部位發(fā)生突變，導(dǎo)致

2、 VWF與 FⅧ結(jié)合能力下降，從而造成 FⅧ在血漿中被過(guò)度水解而明顯降低。3型血管性血友病則是由于VWF基因發(fā)生純合子或復(fù)合雜合子突變導(dǎo)致血漿中 VWF重度減低造成。血管性血友病各型及各亞型的發(fā)病機(jī)制、臨床特征及治療方法各不相同。
　　本實(shí)驗(yàn)采用血管性血友病的診斷試驗(yàn)和分型試驗(yàn)，對(duì)先證者及其家系進(jìn)行表型診斷，并通過(guò)對(duì)先證者及其家系成員的VWF全基因進(jìn)行測(cè)序，尋找導(dǎo)致血管性血友病發(fā)生的基因突變，闡明其分子發(fā)病機(jī)制，從而對(duì)其進(jìn)行基因診

3、斷。
　　方法：
　　1.取先證者及其家系成員的外周血，EDTA抗凝并制備富血小板血漿（PRP），測(cè)定瑞斯托霉素誘導(dǎo)的血小板聚集（RIPA）及ADP誘導(dǎo)的血小板聚集；離心分離出血漿，分別測(cè)定凝血常規(guī)、血漿 VWF抗原（VWF:Ag）、血漿 VWF瑞斯托霉素輔因子活性（VWF:RCo）、血漿 FⅧ凝血活性（FⅧ:C)、VWF與 FⅧ結(jié)合活性（VWF-FⅧ:B/VWF:Ag比值），并進(jìn)行血漿VWF多聚體分析，對(duì)先證者和家系成員進(jìn)

4、行表型診斷。
　　2.提取先證者及其父母的外周血白細(xì)胞基因組 DNA,采用二代測(cè)序法對(duì)DNA進(jìn)行VWF全基因測(cè)序，尋找VWF相關(guān)基因突變，并用一代測(cè)序?qū)ο茸C者的弟弟進(jìn)行驗(yàn)證，明確其分子發(fā)病機(jī)制。
　　結(jié)果：先證者及其弟弟的APTT均延長(zhǎng)，分別為59.3s和68.9s，其父母的APTT均正常；先證者及其家系成員的PT、Fib、TT和 AT均正常；先證者及其弟弟的血漿 VWF:Ag（15.8％和28.7%）、VWF:RCo(16

5、%和30%)、FⅧ:C（2.9%和4.2%）均有不同程度降低，先正者父母的以上檢測(cè)指標(biāo)均正常；先證者及其弟弟、父親的VWF-FⅧ:B/VWF:Ag比值均明顯減低（0.13、0.10、0.19），而其母親的VWF-FⅧ:B/VWF:Ag比值正常。先證者及其弟弟、父親的RIPA均有不同程度減低（20%、27%、30%），其母親的RIPA正常；先證者及其家系成員的ADP誘導(dǎo)的血小板聚集和 VWF多聚體分析均正常。對(duì)先證者及其家系成員進(jìn)行 VW

6、F基因測(cè)序，先證者和其弟弟均分別存在兩種雜合性突變：一種是在 VWF一個(gè)等位基因的第18號(hào)外顯子上存在 c.C2372T（p.T791M）突變，為一種2N型血管性血友病突變，此突變來(lái)自其母親；另一種是在 VWF另一個(gè)等位基因的第49號(hào)外顯子上存在c.C8052A（p.Y2684X）突變，為一種3型血管性血友病突變，此突變來(lái)自其父親。
　　結(jié)論：根據(jù)先證者及其家系成員的臨床特征以及 VWF相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果，進(jìn)行表型診斷為2N/3型