血管性血友病的臨床分析及分子發(fā)病機(jī)制研究.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行了論述。
　　第一部分 162例血管性血友病的臨床分析
　　研究目的：血管性血友病(von Willebrand disease.VWD)是由于血管性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)基因突變引起血漿中VWF數(shù)量減少或質(zhì)量異常所導(dǎo)致的最常見的遺傳性出血性疾病,呈常染色體遺傳?；颊咦杂卓捎休p度或中度皮膚黏膜出血、鼻衄、胃腸道出血及外傷后出血不止等癥狀,女性常有月經(jīng)過多。遺傳性V

2、WD分為三種類型:1型(VWF量的部分缺乏)、2型(VWF質(zhì)的缺陷,又分為2A、2B、2M和2N四個(gè)亞型)和3型(VWF量的完全缺乏),這三種類型和各亞型間具有不同的生理病理機(jī)制,治療方法上也有各自特點(diǎn)。因此需要實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行系列檢測以確保準(zhǔn)確診斷和分型。本部分的回顧性研究代表了單中心血管性血友病(VWD)患者的流行病學(xué)特點(diǎn)、臨床特征、診治現(xiàn)狀。
　　方法：回顧性分析162例VWD患者的臨床資料、分型診斷結(jié)果及治療、轉(zhuǎn)歸情況。

3、　　結(jié)果：162例患者中男性76例、女性86例,男性平均年齡7.2(2.0~41.0)歲,女性平均年齡20.7(5.0~48.0)歲。1型VWD患者86例(53.1％),2型42例(25.9％,2A型33例、2M型4例、2N型5例),3型34例(21.0％)。87例患者(53.7％)有明確家族史。出血表現(xiàn)以皮膚瘀斑(61.7％)、鼻出血(53.7％)、手術(shù)或外傷后出血不止(53.1％)為主,月經(jīng)量多為女性患者常見主訴(66.3％)。Vi

4、cenza出血評分標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果顯示56例患者(34.6％)有異常出血評分。45例患者(27.8％)予血制品替代治療,8例患者使用了1-去氨基-8-右旋-精氨酸血管加壓素治療。57例月經(jīng)量多的女性患者中,25例并發(fā)貧血者予補(bǔ)鐵治療。對于出血量多不易控制的患者,8例需聯(lián)合孕激素控制出血,2例行子宮切除術(shù)。
　　結(jié)論：VWD是臨床表現(xiàn)有較大異質(zhì)性的常見的遺傳性出血性疾病,對于疑診VWD的患者應(yīng)分步進(jìn)行確診及分型檢查,從而有效地實(shí)施個(gè)體化治療

5、。
　　第二部分 6例血管性血友病的實(shí)驗(yàn)診斷和基因分析
　　研究目的：血管性血友病因子(von Willebrand Factor,VWF)是血管內(nèi)皮細(xì)胞和骨髓巨核細(xì)胞合成的一種糖蛋白。VWF質(zhì)的缺陷和量的缺乏會導(dǎo)致血管性血友病(von Willebrand disease,VWD)?；蚍治鲇兄诹私夥肿影l(fā)病機(jī)制,對攜帶者的判定、產(chǎn)前診斷以及患者的預(yù)后、治療都有重要的意義。本研究從6例VWD患者的臨床及基因診斷出發(fā),探討基

6、因型與表現(xiàn)型的相關(guān)性,旨在從分子水平闡明VWD的發(fā)病機(jī)制。
　　方法：采用第一部分所述VWD系列實(shí)驗(yàn),以全血細(xì)胞計(jì)數(shù)(主要為血小板計(jì)數(shù))、部分激活的凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶原時(shí)間(PT)和纖維蛋白原含量(Fg)作為VWD的篩查實(shí)驗(yàn);VWF抗原(VWF∶Ag)測定、VWF瑞斯托霉素輔因子活性(VWF∶Rco)、血漿凝血因子VIII活性(FVIII∶C)作為確診實(shí)驗(yàn);以VWF多聚體分析、瑞斯托霉素誘導(dǎo)的血小板聚集試驗(yàn)(RIPA

7、)、VWF膠原結(jié)合試驗(yàn)(VWF∶CB)、VWF和凝血因子VIII結(jié)合試驗(yàn)(VWF∶FVIIIB)作為分型實(shí)驗(yàn),確診6例遺傳性VWD(分別為3例2A型,3例3型)。為了增加對2A型和3型VWD分子發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識,我們用常規(guī)PCR分別擴(kuò)增這6例VWD患者的VWF基因,并進(jìn)行測序分析。
　　結(jié)果：6例患者中3例為2A型,3例為3型。測序結(jié)果鑒定到7個(gè)基因突變,包括4814A>C(Y1605S)、752A>G(E248G)、4789C>T

8、(R1597W)、421G>A(D141N)、3379+1G>A、2480G>A(C827Y)、3897delT,其中4814A>C(Y1605S)、752A>G(E248G)、2480G>A(C827Y)、3897delT為國際首次報(bào)道。Y1605S的雜合性突變恰位于A2區(qū)ADAMTS13蛋白酶裂解位點(diǎn)(Y1605-M1606),使原來隱藏的位點(diǎn)得以暴露,VWF因子對ADAMTS13水解酶敏感性增加,導(dǎo)致2A型VWD的發(fā)生。E248G

9、的雜合性突變位于D1區(qū),屬于不成熟VWF蛋白的前肽部分,影響VWF多聚化,導(dǎo)致胞內(nèi)貯留,是2A型VWD的發(fā)生原因。R1597W為2A型VWD較常見的突變類型,已被證實(shí)可導(dǎo)致VWF上ADAMTS13蛋白酶裂解位點(diǎn)(Y1605-M1606)附近的空間構(gòu)象發(fā)生改變,使突變蛋白對ADAMTS13敏感性增高。3379+1G>A的純合突變影響正常RNA的剪切過程,產(chǎn)生含有提前終止密碼子的異常剪接體,使得血漿中VWF水平顯著減低。C827Y位于D’區(qū)

10、,D’區(qū)Cys參與VWF鏈內(nèi)二硫鍵形成,與分子內(nèi)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定有關(guān),影響多聚體的形成和促進(jìn)突變蛋白的清除,其合并3897delT的框移突變導(dǎo)致VWF合成顯著減少,推測是3型VWD的發(fā)病機(jī)制。而3型VWD患者4中,僅發(fā)現(xiàn)D141N的雜合性突變,是否存在其他類型的突變及其發(fā)病機(jī)制仍需進(jìn)一步鑒定和研究。
　　結(jié)論：VWD具有復(fù)雜的分子發(fā)病機(jī)制,這不僅要求有一套系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)方法以對VWD進(jìn)行明確診斷和分型,還需要運(yùn)用多種分子生物學(xué)技術(shù)對其進(jìn)行深入