蛋白納米脂質體制備過程中的活性保護研究.pdf

1、為研究蛋白和多肽類藥物在制劑過程中的活性變化及其機理,減少藥物在制劑過程中的活性損失,本文以胰蛋白酶為模型藥物制備納米脂質體,研究制備過程中胰蛋白酶的活性變化,并添加四種活性保護劑保護蛋白活性,通過檢測蛋白的結構變化和分子動力學模擬過程來考察保護劑保護蛋白活性的機制。
　　 1,采用逆向蒸發(fā)法制備胰蛋白酶納米脂質體,粒徑160nm,包封率為47％,Zeta電位-58mv;胰蛋白酶在脂質體制備過程中活性損失為原始蛋白的37％,四種

2、保護劑中PEG對活性的保護效果最好,可使活性保留為原始蛋白的46％,是一種良好的保護劑。
　　 2,采用圓二色譜和傅里葉紅外光譜研究胰蛋白酶在制劑過程中的二級結構變化,應用熒光光譜研究蛋白的三級結構變化。圓二色譜顯示胰蛋白酶在納米脂質體制備過程中其二級結構中的α-螺旋含量由18.7％降為13.2％,β-折疊和β-轉角含量分別由15.6％和27.0％增加到20.3％和31.9％,紅外結果顯示相同趨勢。熒光數(shù)據(jù)表明有機溶劑處理后蛋白

3、熒光性增加,制備成脂質體后熒光性減小,分子更加致密。四種保護劑的加入可以使蛋白的二級結構得到保留,其中PEG的保護效果最佳,但對三級結構的變化影響不大。
　　 3,采用flexX對接和amber軟件對保護劑中最簡單的分子精氨酸和胰蛋白酶活性中心進行了分子對接和分子模擬,研究精氨酸與胰蛋白酶的作用機制。結果顯示精氨酸可進入到胰蛋白酶的活性腔道中,并與之可形成7對氫鍵,兩者結合力很強,理論上可以維持蛋白活性腔的三維結構,保護活性腔不