蛹蟲草CmWC-1、CmWC-2基因的序列分析和藍光誘導表達.pdf

1、蛹蟲草是一種重要的藥食兩用真菌，富含多種生理活性成分包括蟲草多糖、蟲草素等。而藍光作為一種能影響真菌光受體的環(huán)境信號，能調(diào)控多種生物生長及生理學過程。本研究試圖通過分子生物學研究進一步了解藍光對蛹蟲草功能基因表達的誘導，為挖掘蛹蟲草的功能基因?qū)氋F資源提供支持。本研究得到的主要結(jié)果如下:
　　 (1)通過3'RACE法得到蛹蟲草潛在藍光受體基因CmWC-1、CmWC-的3'端部分序列。測序結(jié)果表明CmWC-1基因3'端部分片段長度

2、為1020bp，其中394-452bp為內(nèi)含子;CmWC-2基因3'端序列共1009bp，其中288-353bp為內(nèi)含子。
　　 (2)通過PCR得到CmWC-1、CmWC-2基因開放閱讀框(ORF)序列，全長分別為2823bp和1575bp。序列分析表明CmWC-1基因ORF翻譯后氨基酸序列長度為940aa，推測此蛋白為GATA型鋅指結(jié)合蛋白，包含3個PAS功能域（一個特殊類型PAS域又被稱為LOV域）和一個鋅指結(jié)構(gòu)功能域。C

3、mWC-2基因ORF翻譯后氨基酸序列長度為525aa，推測此蛋白為Cutinasepalindrome-bindingprotein(PBP)蛋白，包含1個PAS功能域。
　　 (3)根據(jù)已得到CmWC-1、CmWC-2基因ORF序列設(shè)計引物，通過PCR得到CmWC-1、CmWC-2基因ORF部分功能域片段，與pEASY-E1ExpressionVector進行連接后導入到Trans-T1受體細胞中。將陽性重組子振蕩培養(yǎng)后提取質(zhì)

4、粒，導入到BL21(DE3)受體細胞中，挑取陽性重組子進行菌落PCR鑒定和測序分析，完成CmWC-1、CmWC-2基因ORF部分功能域原核表達載體的構(gòu)建。CmWC-1基因部分功能域表達序列從開放閱讀框(ORF)第844個核苷酸開始表達，表達全長為1266bp，共計表達433個氨基酸;CmWC-2基因部分功能域表達序列從開放閱讀框(ORF)第286個核苷酸開始表達，表達全長為636bp，共計表達212個氨基酸。
　　 (4)通過實

5、時熒光定量PCR(Real-TimeQuantitativePCR)對蛹蟲草潛在藍光受體基因CmWC-1、CmWC-2基因在藍光誘導下表達量變化進行研究，結(jié)果表明CmWC-1、CmWC-2基因在有無藍光誘導的條件下均有一定量的表達，其中在黑暗培養(yǎng)條件下，CmWC-1基因相對表達量最高，達到0.44;藍光誘導條件下，在16h處出現(xiàn)相對表達量峰值0.37。與CmWC-1基因不同，CmWC-2基因在藍光誘導16h時相對表達量達到峰值3.28，