LPS及Poly (I-C)刺激RSV感染后期小鼠氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性變化及其機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分 LPS及Poly(I:C)刺激RSV感染后期小鼠氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性變化的研究
　　目的：嬰幼兒期感染RSV與隨后反復(fù)喘息及兒童哮喘的發(fā)生密切相關(guān)，但其危險(xiǎn)因素及具體機(jī)制尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)建立RSV感染后期暴露于LPS及Poly(I:C)的動(dòng)物模型,探討RSV感染后暴露于LPS及Poly(I:C)誘發(fā)的氣道炎癥，進(jìn)一步明確RSV感染后反復(fù)喘息的致病機(jī)制。
　　方法：小鼠隨機(jī)分為六組：對(duì)照組、LPS組、RSV組、RS

2、V+LPS組、Poly(I:C)組及RSV+Poly(I:C)組。對(duì)照組、LPS組、RSV組及RSV+LPS組小鼠100μl病毒液滴鼻后第35天給予LPS10μg/50μl PBS或PBS50μl，隔天滴鼻，共四次，于末次滴鼻后24小時(shí)收集標(biāo)本（第42天）；Poly(I:C)組：100μl病毒對(duì)照液滴鼻后第35天給予Poly(I:C)10μg/50μl PBS滴鼻，第三天收集標(biāo)本；RSV+Poly(I:C)組：100μl病毒液滴鼻后第3

3、5天給予Poly(I:C)10μg/50μl PBS滴鼻，第三天收集標(biāo)本。計(jì)數(shù)BALF中細(xì)胞總數(shù)及分類計(jì)數(shù)，H＆E染色觀察肺部病理?yè)p傷，檢測(cè)小鼠AHR，ELISA法檢測(cè)BALF中IFN-γ、IL-4、IL-13、MMP-9及MMP-12水平。
　　結(jié)果：與對(duì)照組、LPS組及RSV組比較，RSV+LPS組小鼠BALF中總的細(xì)胞數(shù)及AHR均顯著增高（P<0.001），RSV+LPS組小鼠肺組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)也較其他三組增強(qiáng)(P<0.01

4、)，BALF中MMP-12表達(dá)也顯著高于其余三組（ P<0.05），而IL-4和IL-13較RSV組明顯降低(P<0.01)，MMP-9及IFN-γ變化無(wú)顯著差異。
　　RSV+ Poly(I:C)組小鼠氣道炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)總數(shù)及氣道反應(yīng)性（AHR）均顯著高與對(duì)照組、Poly(I:C)組及RSV組（P<0.05）；肺組織病理?yè)p傷RSV+Poly(I:C)組小鼠較對(duì)照組及RSV組加重（P<0.01），同時(shí)RSV+Poly(I:C)組小鼠

5、BALF中MMP-9水平較其它三組明顯升高（P<0.05），而RSV+Poly(I:C)組與單純RSV組相比，BALF中IL-4顯著降低（P<0.01），MMP-12、IFN-γ和IL-13降低無(wú)顯著差異。
　　結(jié)論：LPS及Poly(I:C)在RSV感染后期均可引起氣道炎癥及AHR加重，可能通過(guò)MMP-12及MMP-9過(guò)表達(dá)加重氣道炎癥反應(yīng)。
　　第二部分 MMP-12介導(dǎo)RSV感染后期LPS刺激小鼠氣道炎癥及AHR

6、>　　目的：MMP-12與氣道炎癥反應(yīng)及組織重塑密切相關(guān)，研究第一部分發(fā)現(xiàn)RSV感染后期再次暴露于LPS后，小鼠氣道炎癥及AHR均顯著增高，同時(shí)BALF中MMP-12表達(dá)也明顯上調(diào)。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討MMP-12對(duì)RSV感染后期暴露于LPS引起的氣道炎癥和AHR的影響。
　　方法：灌胃給予小鼠MMP-12特異性抑制劑MMP408。小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、RSV組、LPS組、RSV+LPS組及RSV+LPS+MMP408組。細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)

7、BALF中細(xì)胞總數(shù)及各分類細(xì)胞數(shù)，小鼠肺功能儀檢測(cè)氣道阻力值（Penh），HE染色及MASSON染色分別評(píng)價(jià)抑制MMP-12后小鼠肺組織病理?yè)p傷及纖維蛋白沉積情況。
　　結(jié)果：用MMP408成功抑制小鼠肺組織MMP-12的表達(dá)。MMP-12被抑制后小鼠氣道炎癥反應(yīng)及AHR較RSV+LPS組小鼠明顯下降（ P<0.001）,特別是 AHR可以恢復(fù)到對(duì)照組水平；其中RSV+LPS+MMP408組小鼠BALF中中性粒細(xì)胞顯著下降，淋巴細(xì)