免疫促凋亡scFv-Fdt-tBid基因修飾間充質干細胞的雙靶向治療前列腺癌的研究.pdf

1、當前，在世界范圍內前列腺癌發(fā)病率已躍居男性所有惡性腫瘤的第二位，且其在發(fā)展中國家中的發(fā)病率越來越高。目前雖然對前列腺癌有多種治療方法，但是對于轉移性及去勢抵抗性的前列腺癌目前仍然沒有有效的治療措施。本實驗組著眼于前列腺癌靶向治療策略的建立，曾成功構建了抗前列腺特異性抗原（prostate specific antigen PSA）的特異性單克隆抗體的單鏈抗體基因。在此基礎上我們此次成功構建了免疫源性低、滲透性強的PSA靶向重組免疫殺傷分

2、子scF v-Fdt-tBid，該分子由三部分構成，分別為特異性針對PSA的單鏈抗體scF v基因、白喉外毒素膜轉位功能肽Fdt編碼序列及凋亡誘導片段截短型Bid基因tBid序列。
　　然而，如果單純的將重組分子導入機體內會存在許多問題影響重組靶向分子的作用效果如：重組分子需經過血液循環(huán)后才能聚集于腫瘤局部，作用距離長容易被機體免疫系統(tǒng)清除外還難以在腫瘤局部保證靶向殺傷分子的作用濃度，此外實體瘤內壓力大導致重組分子難以進入腫瘤內部

3、亦影響其作用效果。
　　間充質干細胞（mesenchymal stem cell MSC）是一種在大量人體組織中存在的成體干細胞，由于其特異性的腫瘤趨向性、自體移植的可行性及基因修飾的穩(wěn)定性使其成為了一種絕佳的介導基因治療的細胞載體。同時他們取材容易、體外擴增迅速及旁分泌能力強大同樣顯示著其作為細胞載體遞送免疫促凋亡分子的潛能。因此，我們設想利用MSC作為細胞載體，用重組基因scFv-Fdt-tBid對其進行修飾，通過尾靜脈注射的

4、方式使其進入循環(huán)系統(tǒng)，趨向富集于腫瘤組織局部并持續(xù)分泌表達scFv-Fdt-tBid，從而在腫瘤局部建立高濃度、近距離、長時程靶向結合殺死PSA陽性前列腺癌細胞的雙重靶向治療模式。
　　體外實驗結果顯示，scF v-Fdt-tBid能在MSC細胞中穩(wěn)定表達并分泌，并能有效下調PSA陽性的LNCaP細胞、C4-2細胞、22RV1前列腺癌細胞的存活率。重組分子的表達對于MSC的增殖能力、分化能力等無明顯影響。在共培養(yǎng)實驗中，MSC.s

5、cFv-Fdt-tBid能有效地、特異地誘導PS A陽性前列腺癌細胞凋亡。在腫瘤趨向性檢測中，體外Transwell實驗顯示前列腺癌細胞培養(yǎng)上清能有效地誘導MSC. scFv-Fdt-tBid的遷移。
　　在體內試驗中，小動物成像實驗顯示MSC. scFv-Fdt-tBid-LUC細胞通過尾靜脈注射后能有效趨向于腫瘤部位并大量聚集，且間接免疫熒光染色顯示在肝、心、脾、肺、腎組織內很少檢測到重組分子表達，而在腫瘤部位重組分子高表達。

6、體內抑瘤實驗結果顯示MSC. scFv-Fdt-tBid能明顯抑制22RV1皮下腫瘤的生長，且腫瘤組織中檢測到明顯的凋亡發(fā)生，而通過對血液相關指標檢測及內臟組織HE染色檢測檢測未發(fā)現(xiàn)明顯的毒副作用。
　　綜上所述，本實驗構建前列腺癌雙重靶向殺傷模式能有效的誘導基因修飾的MSC在腫瘤部位聚集，并持續(xù)釋放重組靶向殺傷分子對腫瘤實現(xiàn)有力的抑制作用。這種雙靶向的治療策略的提出是對前列腺癌傳統(tǒng)治療策略的一種有力的補充，并且對于臨床靶向治療的