MiR-150介導(dǎo)CXCR4調(diào)控糖尿病腎病間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢.pdf

1、目的:探討miR-150對DN間充質(zhì)干細(xì)胞趨化歸巢的影響是否是通過靶向調(diào)控CXCR4/SDF-1信號通路實(shí)現(xiàn)
　　方法：提取C57BL/6J小鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，通過成骨，成脂誘導(dǎo)及表面分子鑒定建立原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞系。Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染miR-150 mimic，miR-150 inhibit及control至原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，通過 RT-PCR技術(shù)檢測骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 miR-150的表達(dá)情況。

2、通過western-blot檢測CXCR4和SDF-1蛋白的表達(dá)，采用生物信息學(xué)軟件檢測miR-150的靶基因，通過transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移；移植已構(gòu)建好的 miR-150慢病毒表達(dá)載體至DN小鼠，檢測小鼠的24小時(shí)尿蛋白，血糖，腎臟比重；HE染色觀察腎臟的形態(tài)變化，western-blot檢測腎臟指標(biāo)蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 CD29, CD90陽性表達(dá)（97±2.25％）、（9

3、9±0.6%），CD45呈陰性表達(dá)（17±4.5%），并且可向脂肪細(xì)胞、骨細(xì)胞分化，符合干細(xì)胞特性。 DN組骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞miR-150的表達(dá)較 Normal組顯著降低（p﹤0.05），DN組小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中遷移相關(guān)蛋白 CXCR4和 SDF-1表達(dá)均顯著高于正常小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（p﹤0.05)；
　　生物信息學(xué)研究發(fā)現(xiàn)CXCR4含有miR-150的結(jié)合位點(diǎn)，且在多個(gè)物種中呈高度保守。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中過表達(dá) miR-

4、150后 CXCR4表達(dá)水平明顯下降（p﹤0.05），而抑制miR-150的表達(dá)CXCR4表達(dá)顯著增加（ p﹤0.05）；Transwell遷移實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)miR-150能顯著抑制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移，抑制 miR-150后細(xì)胞遷移能力提高；
　　尾靜脈注射移植感染 miR-150慢病毒的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞入 DN小鼠，治療4周后，miR-150 inhibitor-MSC組小鼠尿蛋白明顯低于DN未治療組，血糖也比 D

5、N組小鼠明顯下降，腎臟指數(shù)同樣比 DN組有所降低（p﹤0.05），HE染色發(fā)現(xiàn)miR-150 inhibitor-MSC組腎臟組織病理形態(tài)學(xué)明顯改善。Western-blot檢測發(fā)現(xiàn)腎臟組織中 DN組高表達(dá)CXCR4/SDF-1蛋白，miR-150 inhibitor-MSC治療后CXCR4和SDF-1蛋白表達(dá)降低（p﹤0.05）。
　　結(jié)論：抑制miR-150的表達(dá)會引起CXCR4表達(dá)增加，從而刺激骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢，修復(fù)受損