胰島聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細胞治療糖尿病大鼠的研究.pdf

1、以標(biāo)準(zhǔn)的糖尿病大鼠為模型，探索同種異體的SD大鼠胰島聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細胞（Bone Marrow Mesenchymal Cells,BMSCs)能否提高治療糖尿病的遠期療效，為臨床開展胰島聯(lián)合BMSCs移植治療糖尿病的提供實驗依據(jù)，并觀察同種異體大鼠聯(lián)合BMSCs移植后細胞在體內(nèi)的分布、歸巢情況，為臨床細胞移植后細胞的定植、歸巢提供理論依據(jù)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴鏈脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）構(gòu)建大鼠糖

2、尿病模型；貼壁法分離、培養(yǎng)BMSCs，免疫熒光法和流式細胞鑒定BMSCs的表面抗原（CD44、CD34、CD90、CD45、CD29）；膠原酶法分離大鼠胰島，雙硫腙法(Dithizone，DTZ)鑒定胰島細胞；將細胞分為對照組；BMSCs培養(yǎng)組；單獨胰島組；胰島與BMSCs共培養(yǎng)組，于培養(yǎng)后的第1、3、7天取其上清液進行ELISA法檢測各組的胰島素與C-肽的分泌；18F-FDG體外標(biāo)記胰島與BMSCs，隨機將糖尿病大鼠分成：對照（n=1

3、5)、單獨胰島移植組（n=15)、單獨BMSCs移植組（n=15)、胰島與BMSCs聯(lián)合移植(n=15)，經(jīng)門靜脈移植分別移植（對照組0.2ml生理鹽水；胰島組0.2ml胰島500IEQ/100g；干細胞組0.2ml的3*10^5/100g個 BMSCs；聯(lián)合組0.1ml胰島500IEQ/100g+0.1ml3*10^5/100g個BMSCs)。移植后的第1、3、7、14、30天每組每次均隨機處死3只大鼠，取肝臟、血液，ELISA測量移

4、植后各組大鼠血清的胰島素與C-肽的含量及檢測大鼠的血清的肝功能，免疫熒光法了解肝組織內(nèi)胰島素的表達情況，HE檢測肝臟的病理情況，PET-CT示蹤移植入體內(nèi)的細胞分布情況。⑵經(jīng)STZ法誘導(dǎo)糖尿病大鼠期間有95％的大鼠血糖濃度在一周內(nèi)有3天連續(xù)高于16.8mmol/L的，伴隨體重下降，總膽紅素、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶均升高；經(jīng)全貼壁法培養(yǎng)的BMSCs大多是呈長梭形生長，免疫熒光法的檢測結(jié)果顯示BMSCs為CD44陽性，CD34陰性，流式細胞

5、儀測量結(jié)果表明BMSCs是高表達CD90、CD29，低表達CD45的；膠原酶法能夠很有效的分離出胰島細胞，且被DTZ染成猩紅色的就是胰島細胞，未被染成猩紅色的就是外分泌腺；體外共培養(yǎng)中的胰島形態(tài)與單獨胰島的形態(tài)相比保存的更好，存活的時間也更長，胰島素與C-肽的分泌也較單獨胰島的高；移植后聯(lián)合組的血糖在正常血糖內(nèi)波動一個月，單獨胰島組的血糖水平只能在正常血糖范圍波動3天，單獨BMSCs組、對照組的大鼠在移植后的血糖水平未明顯降低。聯(lián)合組在

6、移植后的第1、7、14、21、30天的血糖明顯低于單獨胰島組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；聯(lián)合組比胰島組能有效的修復(fù)肝臟的功能；聯(lián)合組的胰島素與C-肽的分泌也比單獨胰島組高；聯(lián)合組和單獨胰島組的炎細胞侵潤都不明顯。PET-CT結(jié)果顯示，BMSCs主要均勻分布在肝臟的右肝，胰島主要聚集在肝門靜脈末端分支，且BMSCs圍繞在胰島的周圍，對照組的肝臟無明顯的顯影。⑶同種異體的胰島聯(lián)合BMSCs治療大鼠糖尿病的效果優(yōu)于單獨胰島移植。PET