PLTP在香煙誘導(dǎo)A549細(xì)胞合成白介素-8中的作用.pdf

1、目的：香煙煙霧暴露是導(dǎo)致肺氣道損傷的重要危險(xiǎn)因素之一，而肺泡表面活性物質(zhì)主要成分脂蛋白代謝紊亂與肺損傷的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，香煙的吸入能使肺部作為表面活性物質(zhì)重要成分的PLTP表達(dá)增加。然而PLTP與香煙煙霧所引起的肺損傷之間關(guān)系方面的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。因此本研究主要探討PLTP對(duì)香煙煙霧誘導(dǎo)人肺泡上皮細(xì)胞A549細(xì)胞合成IL-8的影響。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)采取整體實(shí)驗(yàn)及離體實(shí)驗(yàn)，第一部分采用SD大鼠連續(xù)三天被動(dòng)吸煙誘導(dǎo)肺損傷模型，肺組

2、織切片經(jīng)HE染色觀察被動(dòng)吸煙所造成的肺損傷情況，免疫組化檢測(cè)PLTP及IL-8表達(dá)情況，計(jì)算BALF中白細(xì)胞總數(shù)，分類計(jì)數(shù)中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞。第二部分探討不同濃度CSE對(duì)人肺泡II型上皮細(xì)胞A549細(xì)胞增殖情況的影響，并探討CSE誘導(dǎo)A549細(xì)胞合成IL-8的濃度及時(shí)間依賴效應(yīng)。在檢測(cè)CSE對(duì)A549細(xì)胞增殖情況影響的實(shí)驗(yàn)中，體外培養(yǎng)人肺泡II型上皮A549細(xì)胞株24h，加入0.125％、0.25%、0.5%、1.0%、2.

3、0%、4.0%濃度CSE共培養(yǎng)24h，經(jīng)MTT法檢測(cè)A549細(xì)胞增殖情況；然后進(jìn)入濃度效應(yīng)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)組加入0.25%、0.5%、1.0%濃度CSE刺激，孵育24小時(shí)后分別收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)上清液，經(jīng)RT-PCR及ELISA分別檢測(cè)IL-8 mRNA和IL-8蛋白表達(dá)情況，提取細(xì)胞總蛋白，通過(guò)Westernblot測(cè)定PLTP蛋白表達(dá)情況；在時(shí)間效應(yīng)實(shí)驗(yàn)中，于實(shí)驗(yàn)組加入1.0%濃度CSE，分別在6、12、24、48小時(shí)收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液，

4、經(jīng)ELISA法檢測(cè)IL-8含量。第三部分重點(diǎn)探討PLTP在香煙誘導(dǎo)A549細(xì)胞分泌IL-8中的作用。實(shí)驗(yàn)組給予PLTP siRNA預(yù)處理，經(jīng)CSE刺激后收集上清液檢測(cè) IL-8蛋白表達(dá)情況，提取細(xì)胞總 RNA通過(guò) RT-PCR測(cè)定PLTP及IL-8 mRNA表達(dá)情況，提取細(xì)胞總蛋白通過(guò)Western blot測(cè)定PLTP及IL-8蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：在第一部分實(shí)驗(yàn)中，3天香煙暴露之后煙熏組大鼠肺組織充血水腫；HE染色顯示正常

5、肺組織肺泡結(jié)構(gòu)完整正常，無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，而煙熏組血管腔充血，肺間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡腔擴(kuò)大斷裂，肺泡融合；IHC結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，煙熏組肺上皮細(xì)胞PLTP和IL-8表達(dá)升高；在 BALF中，煙熏組白細(xì)胞總數(shù)顯著高于對(duì)照組，并且中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)均明顯高于空白對(duì)照組。在第二部分實(shí)驗(yàn)中，在同一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，A549細(xì)胞經(jīng) CSE刺激后合成的 IL-8均明顯高于對(duì)照組，隨著 CSE刺激濃度的增加，A549細(xì)胞合成 IL-8亦

6、隨之增加，當(dāng)CSE作用濃度為1.0%時(shí)，IL-8的蛋白合成比對(duì)照組增加近2倍；而在時(shí)間依賴效應(yīng)實(shí)驗(yàn)中，CSE作用6小時(shí)后，細(xì)胞上清液中就可以檢測(cè)到IL-8的表達(dá)，A549細(xì)胞合成IL-8的高峰出現(xiàn)在24小時(shí)。在第三部分實(shí)驗(yàn)中，沉默PLTP基因不僅能在基礎(chǔ)水平而且還能在CSE共同作用A549細(xì)胞情況下促進(jìn)IL-8的合成。
　　結(jié)論：香煙煙霧能夠?qū)е路尾考毙匝装Y反應(yīng)，并且可誘發(fā)肺組織合成PLTP及IL-8；CSE可誘導(dǎo)人肺泡上皮細(xì)胞合