巨噬細(xì)胞源性CCL2通過(guò)TLR4-CCR2途徑招募中性粒細(xì)胞促進(jìn)肝缺血再灌注損傷.pdf

1、研究背景：
　　肝臟缺血再灌注損傷，臨床上多見(jiàn)于失血性休克、肝移植、肝切除術(shù)后、感染性休克等情況下，是嚴(yán)重影響患者生命及疾病預(yù)后的一類以肝臟免疫失調(diào)及全身性炎癥反應(yīng)為主要特征的多因素病理過(guò)程。
　　在肝臟缺血再灌注損傷過(guò)程中，中性粒細(xì)胞作為一類快速反應(yīng)性免疫細(xì)胞，可以在多種趨化因子的作用下從骨髓動(dòng)員并浸潤(rùn)到受損的肝臟組織中，進(jìn)而造成肝損傷。參與中性粒細(xì)胞動(dòng)員及浸潤(rùn)的趨化因子種類繁多，其中以CXCL1和CXCL2在骨髓動(dòng)員過(guò)程

2、中發(fā)揮的作用最為主要。炎性單核細(xì)胞作為細(xì)胞因子庫(kù)，其動(dòng)員和浸潤(rùn)稍晚于中性粒細(xì)胞，在肝臟缺血再灌注過(guò)程中可以釋放多種趨化因子和細(xì)胞因子，從而擴(kuò)大炎癥反應(yīng)。炎性單核細(xì)胞的動(dòng)員和浸潤(rùn)主要依賴于CCL2-CCR2信號(hào)通路。然而，在肝缺血再灌注過(guò)程中，這兩種細(xì)胞的動(dòng)員和浸潤(rùn)的具體機(jī)制及其與體內(nèi)免疫細(xì)胞間的相互作用目前仍不完全清楚。
　　研究目的：
　　1.探討肝臟缺血再灌注過(guò)程中中性粒細(xì)胞動(dòng)員的機(jī)制。
　　2.闡明免疫細(xì)胞之間和

3、重要免疫細(xì)胞受體分子之間相互關(guān)系。
　　研究方法：
　　對(duì)野生型、CCL2-/-、CCR2-/-和TLR4-/-小鼠進(jìn)行肝臟缺血1小時(shí)再灌注6小時(shí)模型的建立。從組織學(xué)、肝功能和炎性因子表達(dá)三個(gè)方面來(lái)評(píng)價(jià)肝臟損傷情況。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)骨髓和肝臟中性粒細(xì)胞比例及其表面CCR2的表達(dá)情況。細(xì)胞內(nèi)因子染色檢測(cè)肝臟組織內(nèi)CCL2的細(xì)胞來(lái)源。尾靜脈注射重組鼠類CCL2檢測(cè)其對(duì)中性粒細(xì)胞趨化作用。利于氯磷酸二鈉脂質(zhì)體刪除體內(nèi)巨噬細(xì)胞來(lái)驗(yàn)證細(xì)

4、胞間相互作用關(guān)系。
　　研究結(jié)果：
　　與野生型小鼠相比，CCL2-/-、CCR2-/-和TLR4-/-小鼠肝損傷減輕，中性粒細(xì)胞骨髓動(dòng)員和肝臟浸潤(rùn)減少。中性粒細(xì)胞動(dòng)員及浸潤(rùn)依賴于其表面CCR2的表達(dá)。刪除肝臟枯否細(xì)胞后，肝損傷減輕，CCL2表達(dá)減少，中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)減少。炎性單核細(xì)胞的動(dòng)員及浸潤(rùn)完全依賴于CCL2-CCR2信號(hào)通路。中性粒細(xì)胞通過(guò)TLR4的激活進(jìn)而活化其表面受體CCR2從而介導(dǎo)中性粒細(xì)胞招募。
　　研究