MALP-2通過TLR2-NF-кB-ZNF202途徑下調(diào)THP-1巨噬細胞ABCA1表達.pdf

1、目的：三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1（ABCA1）作為介導(dǎo)細胞內(nèi)游離膽固醇（FC）和磷脂流出至貧脂的載脂蛋白（apoA-I）接受體的關(guān)鍵轉(zhuǎn)運蛋白，對減少細胞內(nèi)膽固醇蓄積和抑制泡沫細胞形成具有重要意義。巨噬細胞活化脂肽-2（MALP-2）是從發(fā)酵支原體細胞壁上提取的一種脂多肽，能特異性識別靶細胞膜上的Toll樣受體（TLRs），與動脈粥樣硬化（As）形成密切相關(guān)，但MALP-2是否能調(diào)控ABCA1表達仍不清楚。本研究旨在闡明MALP-2對TH

2、P-1巨噬細胞ABCA1表達的影響及相關(guān)機制。
　　方法：培養(yǎng)THP-1單核細胞，依次加入佛波酯（PMA）、氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）孵育，使其最終分化為THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞，經(jīng)不同濃度的MALP-2（0、25、50、100、200 mM）處理細胞24 h或以100 mM MALP-2處理細胞不同時間（0、6、12、24、48 h）后，行油紅O染色觀察細胞蓄脂情況，高效液相色譜法（HPLC）檢測細胞內(nèi)總膽固醇（TC

3、）、FC及膽固醇酯（CE）含量，液體閃爍計數(shù)法分析細胞內(nèi)膽固醇流出，熒光實時定量PCR、Western blot分別測定ABCA1 mRNA、蛋白表達。予TLR2/核因子-κB（NF-κB）/鋅指蛋白202（ZNF202）信號通路的抑制劑或小干擾RNA（siRNA）預(yù)處理THP-1 巨噬細胞源性泡沫細胞24 h，再用100 mM MALP-2處理24 h，運用Western blot檢測TLR2、ZNF202、ABCA1及核內(nèi)

4、NF-κB p65蛋白表達，熒光實時定量PCR檢測ABCA1 mRNA表達。
　　結(jié)果：ox-LDL+MALP-2處理組細胞內(nèi)脂滴含量較 ox-LDL處理組升高，MALP-2呈濃度和時間依賴性增加細胞內(nèi) TC、FC及CE含量，但減少膽固醇流出率并降低ABCA1mRNA與蛋白表達水平。用NF-κB抑制劑吡咯烷二硫氨基甲酸（PDTC）預(yù)處理或轉(zhuǎn)染TLR2、NF-κB、ZNF202 siRNA后，MALP-2誘導(dǎo)的ABCA1表達下調(diào)被部