肝癌精準(zhǔn)放療技術(shù)的臨床應(yīng)用及基于PI3K-Akt信號(hào)通路為基礎(chǔ)的放射性肝損傷分子機(jī)制研究.pdf

1、研究目的:
　　1）探討經(jīng)肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)聯(lián)合放射治療(trans-arterial chemoemolization+ Radiotherapy，TACE+RT)與肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)(TACE)對(duì)比治療中晚期肝癌的有效性和安全性;
　　2）探索引發(fā)放射性肝損傷（radiation induced liver damage，RILD）的潛在機(jī)制和靶點(diǎn)，及其相關(guān)信號(hào)通路改變的關(guān)鍵靶點(diǎn)。
　　研究方法:
　　1）回顧性

2、分析本研究中心2012年1月到2013年6月75例中晚期原發(fā)性肝癌并接受TACE+RT（25例）或單純TACE（50例）治療患者的臨床療效;
　　2）體內(nèi)試驗(yàn):雄性SD大鼠48只，隨機(jī)分為模型組（24只）和對(duì)照組（24只）。模型組大鼠均給予右側(cè)半肝6MV的X線單次30Gy照射，對(duì)照組予以相同方式假照射，于照射后3天、5天、10天隨機(jī)抽取模型組大鼠6只，對(duì)照組6只，檢測(cè)血清AST、ALT、ALP、TB、DB的變化情況;HE染色和Ma

3、sson染色法進(jìn)行大鼠放射性肝損傷組織學(xué)分析，免疫組化分析放射性肝損傷細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子表達(dá)情況;
　　3）體外實(shí)驗(yàn):以不同劑量6MVX射線(0、10和20Gy)照射大鼠肝星狀細(xì)胞系HSC-T6，并用PI3K/Akt信號(hào)通路特異性抑制劑LY294002處理48h后，流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)細(xì)胞上清液轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)的濃度;RT-PCR檢測(cè)Akt及平滑肌激動(dòng)蛋白(α-S

4、MA)的mRNA表達(dá)量;Western blot檢測(cè)p-Akt的表達(dá)量。
　　研究結(jié)果:
　　1）隨訪75例HCC患者，根據(jù)治療方法分為聯(lián)合組與單獨(dú)TACE組。單獨(dú)TACE組50例，中位生存時(shí)間為7個(gè)月;聯(lián)合組25例，中位生存時(shí)間為13個(gè)月，繪制Kaplan-Meier生存曲線并進(jìn)行l(wèi)og-rank檢驗(yàn)表明聯(lián)合組與單純TACE組時(shí)間比較差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=28.72，P＜0.05）;
　　2）體內(nèi)實(shí)驗(yàn):在照射后第

5、3天、5天、10天，模型組大鼠血清AST、ALT、ALP、TB、DB均逐漸升高，明顯高于對(duì)照組。HE及Masson染色顯示輻射誘導(dǎo)肝臟急性損傷大鼠肝血竇周圍膠原纖維較對(duì)照組生成明顯。免疫組化顯示:隨照射后觀察時(shí)間的延長(zhǎng)TGF-β1、α-SMA、p-Akt(S473)的表達(dá)逐漸增強(qiáng)，經(jīng)過(guò)IPP分析差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.000）;
　　3）體外實(shí)驗(yàn):FCM結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，10和20Gy組細(xì)胞的凋亡率隨照射劑量的增加而增加

6、(t=8.43，11.63，P＜0.05);與單純照射組比較，相同照射劑量加抑制劑組細(xì)胞的凋亡率降低(t=8.09，4.89，P＜0.05)。ELISA法結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，10和20Gy組細(xì)胞分泌TGF-β1的量隨照射劑量的增加而增加（t=11.51，19.02，P＜0.05）;與單純照射組比較，相同照射劑量加抑制劑后細(xì)胞分泌TGF-β1的量降低(=6.17，10.04，P＜0.05)。RT-PCR檢測(cè)Akt及α-SMA的表達(dá)量結(jié)

7、果顯示，與10Gy組比較，20Gy組Akt及α-SMA的表達(dá)量增加（t=4.89，7.80，P＜0.05），10Gy+LY294002組Akt及α-SMA的表達(dá)量降低(=13.66，15.11，P＜0.05);與20Gy組比較，20Gy+LY294002組Akt及α-SMA的表達(dá)量降低（=6.20，6.85，P＜0.05）。Western blot檢測(cè)p-Akt的表達(dá)量顯示，與對(duì)照組比較，10和20Gy組細(xì)胞p-Akt的表達(dá)量隨照射劑量

8、的增加而增加（t=5.74，31.23，P＜0.05）;與單純照射組比較，相同照射劑量加抑制劑組p-Akt的表達(dá)量降低(t=10.34，23.84，P＜0.05)。
　　研究結(jié)論:對(duì)于中晚期原發(fā)性肝癌TACE+RT聯(lián)合治療優(yōu)于TACE單獨(dú)治療。在單次大劑量輻射導(dǎo)致急性放射性肝臟損傷過(guò)程中，伴隨肝臟星狀細(xì)胞的活化，TGF-β1分泌增加及PI3K/Akt信號(hào)通路的活化，其機(jī)制可能與PI3K/Akt信號(hào)通路的激活有關(guān)，PI3K/Akt信