人胰腺導(dǎo)管腺癌細(xì)胞PL45的核酸適配體篩選及其靶標(biāo)鑒定.pdf

1、胰腺癌是一種惡性程度很高，診斷和治療都很困難的消化腺惡性腫瘤，是目前最嚴(yán)重的癌癥之一，病理類(lèi)型包括導(dǎo)管腺癌、腺泡細(xì)胞癌、小腺體癌、大嗜酸性顆粒細(xì)胞性癌等，其中胰腺導(dǎo)管腺癌是胰腺癌中最常見(jiàn)的一種，占胰腺癌發(fā)病率的95％，往往晚期時(shí)才被發(fā)現(xiàn)。目前胰腺癌最有效的治療手段是手術(shù)切除，但是5年生存率仍不足6％，因此發(fā)現(xiàn)新的檢測(cè)胰腺癌特異性的分子探針，尋找新的腫瘤標(biāo)志物，對(duì)于胰腺癌的防治具有重要的作用。
　　為了獲得特異性識(shí)別胰腺導(dǎo)管腺癌的核

2、酸適配體，我們合成了ssDNA文庫(kù)，以人胰腺導(dǎo)管腺癌細(xì)胞系PL45為靶標(biāo)細(xì)胞，以人永生化胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞系hTERT-HPNE為對(duì)照細(xì)胞，進(jìn)行cell-SELEX篩選。通過(guò)15輪篩選，發(fā)現(xiàn)ssDNA庫(kù)達(dá)到最大富集。利用高通量測(cè)序技術(shù)，根據(jù)序列的同質(zhì)性，分成了六個(gè)家族，挑選了每個(gè)家族的第一條用于進(jìn)一步的鑒定，發(fā)現(xiàn)XQ-2能特異性結(jié)合人胰腺導(dǎo)管腺癌細(xì)胞系PL45，而不結(jié)合對(duì)照細(xì)胞系hTERT-HPNE，結(jié)合人胰腺導(dǎo)管腺癌細(xì)胞系PL45的解離

3、常數(shù)約為82.5nM。
　　通過(guò)逐漸刪減兩端固定序列的方式對(duì)篩選出的核酸適配體XQ-2的序列進(jìn)行分析優(yōu)化，流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明經(jīng)過(guò)刪減后的核酸適配體XQ-2d與靶細(xì)胞PL45的結(jié)合能力更強(qiáng)。為了提高核酸適配體在復(fù)雜環(huán)境中的穩(wěn)定性，對(duì)刪減后的核酸適配體XQ-2d進(jìn)行了化學(xué)修飾，發(fā)現(xiàn)經(jīng)甲氧基修飾的刪減后的核酸適配體，不僅保持了與靶細(xì)胞高效的結(jié)合能力，還可以明顯提高其穩(wěn)定性，這有利于其在生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用。
　　為了考察核酸適配體在復(fù)

4、雜生物環(huán)境下的識(shí)別性能，本文表征了核酸適配體與臨床病理石蠟組織切片以及小鼠活體腫瘤的結(jié)合情況，切片結(jié)果表明核酸適配體對(duì)癌組織的識(shí)別效率高達(dá)82.5％，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對(duì)正常組織的識(shí)別。在小鼠活體腫瘤實(shí)驗(yàn)中，尾靜脈注射5分鐘后，在腫瘤位置開(kāi)始富集，60分鐘后富集達(dá)到最強(qiáng)，180分鐘后腫瘤位置仍有信號(hào)，表明核酸適配體在復(fù)雜環(huán)境中仍能保持良好的識(shí)別能力，并且保持高度的組織特異性。
　　目前胰腺導(dǎo)管腺癌的腫瘤標(biāo)志物較少，無(wú)特異性，且用途不廣，十分