重組人可溶性白介素4受體噬菌體單鏈抗體庫的構(gòu)建與篩選.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、單鏈抗體(Single chain antibody，ScFv)是目前分子量最小的抗體，具有對腫瘤組織的穿透力強，可以與其他效應分子連接成抗腫瘤融合蛋白等特點，是保持抗體親和性和特異性的最小功能性抗體片段，廣泛應用于醫(yī)學和生物技術(shù)研究領(lǐng)域。
　　研究發(fā)現(xiàn)，多種腫瘤細胞表面如胰腺癌、乳腺癌和肺癌等癌細胞存在過量表達白介素4受體(IL-4R)現(xiàn)象。進一步研究證實IL-4R有高度的腫瘤細胞表達特異性，具備作為免疫毒素作用靶點的要求，其配

2、體或抗體易于獲得、便于實驗。
　　本研究利用重組人可溶性白介素4受體蛋白抗原免疫Balb/c小鼠，TRIZOL法提取總RNA，RT-PCR擴增VH和VL基因，SOE-PCR擴增出帶有限制性酶切位點的ScFv，利用限制性內(nèi)切酶SfiⅠ和NotⅠ分別對ScFv和pCANTAB5E載體進行雙酶切，利用T4連接酶進行兩者的連接，并轉(zhuǎn)入感受態(tài)細菌E.coli TG1中制作轉(zhuǎn)化子，在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到噬菌體單鏈抗體庫，通過3輪富集和篩選，選擇

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