SIRT3在尿酸誘導(dǎo)的腎小球系膜細胞轉(zhuǎn)分化中的表達變化及意義.pdf

1、沉默信息調(diào)節(jié)因子3(Silent information regulator3,SIRT3)是一種NAD+依賴的去乙?；?具有去乙?；富钚?在腎臟、肝臟、肌肉、心臟等組織中高表達。近年來對于SIRT3的研究越來越多,研究人員將它視為一個能調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激（Oxidative stress，OS）及代謝的線粒體去乙?；?，在細胞氧化應(yīng)激、物質(zhì)代謝、衰老、凋亡等方面發(fā)揮著重要作用。
　　高尿酸血癥是導(dǎo)致慢性腎臟?。–hronic ki

2、dney disease，CKD）的重要原因之一。已有研究顯示在高濃度尿酸（Uric acid，UA）刺激下，腎臟細胞可出現(xiàn)氧化負荷增加、凋亡、轉(zhuǎn)分化等，造成腎臟不同程度的病理改變。在高尿酸血癥患者細胞及組織中往往會檢測到活性氧自由基（Reactive oxygen species，ROS）產(chǎn)生增加，提示氧化應(yīng)激可能參與了尿酸性腎?。║ric acid nephropathy，UAN）的發(fā)展，SIRT3可能發(fā)揮了重要作用。然而目前對于尿

3、酸導(dǎo)致腎小球系膜細胞病理變化的研究相對較少，且SIRT3在尿酸性腎病發(fā)病過程中的作用尚無研究報道。
　　第一章:尿酸對腎小球系膜細胞轉(zhuǎn)分化的影響及此過程中SIRT3的表達變化
　　目的：探討尿酸對小鼠腎小球系膜細胞（Mesangial cell，MC）氧化應(yīng)激、轉(zhuǎn)分化的影響，以及SIRT3在此過程中的表達變化。
　　方法：將不同濃度的尿酸（0.05，0.1，0.3mmol/L）與MC共孵育48h,以2',7'－二氯熒光

4、素二乙酸酯（Dichloro fluorescein diacetate ester,DCF-DA)為熒光探針，用熒光顯微鏡和流式細胞術(shù)檢測各組活性氧ROS水平，用qRT-PCR和western blotting檢測各組SIRT3以及轉(zhuǎn)分化標志物α平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),轉(zhuǎn)化生長因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1),纖連蛋白(Fibrone

5、ctin,FN)mRNA和蛋白的表達。
　　結(jié)果：與對照組相比，尿酸能誘導(dǎo)腎小球系膜細胞ROS水平呈濃度依賴性上調(diào)(P<0.05)，SIRT3 mRNA及蛋白表達量呈濃度依賴性下降(P<0.05)，細胞α-SMA、TGF-β1、FN mRNA和蛋白的表達量均呈濃度依賴性上調(diào)(P<0.05)。
　　結(jié)論：高濃度尿酸能誘導(dǎo)MC53細胞發(fā)生轉(zhuǎn)分化，并下調(diào)SIRT3mRNA及蛋白的表達。
　　第二章:SIRT3對腎小球系膜細胞

6、氧化應(yīng)激及轉(zhuǎn)分化的影響
　　目的：了解SIRT3對尿酸刺激下MC氧化應(yīng)激及轉(zhuǎn)分化的影響。
　　方法：以siRNA-Mate作為轉(zhuǎn)染試劑，將SIRT3 siRNA轉(zhuǎn)染入MC；將細胞株分為三組：0.1mmol/L尿酸+SIRT3 siRNA組（UA+siSIRT3)、0.1mmol/L尿酸組(UA)和0.1mmol/L尿酸+陰性對照組(UA+NC)。轉(zhuǎn)染成功后將0.1mmol/L尿酸與三組細胞共孵育48h，以2',7'－二氯熒光

7、素二乙酸酯（DCF-DA)為熒光探針，用流式細胞術(shù)檢測各組活性氧ROS水平，用qRT-PCR和western blotting檢測各組α-SMA,TGF-β1,FN mRNA和蛋白的表達。
　　結(jié)果：經(jīng)qRT-PCR鑒定提示成功轉(zhuǎn)染SIRT3 siRNA；與UA組、UA+NC組相比，UA+siSIRT3組ROS水平及α-SMA, TGF-β1, FN蛋白的表達均明顯上升(P<0.05)，而UA組與UA+NC組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（