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文檔簡介
1、果蠅是一種模式生物，有著豐富的遺傳學(xué)表型，在基因功能的研究中常被使用。waw基因是E.coli中LepA在果蠅中的同源基因。 LepA是翻譯延伸因子，在核糖體翻譯蛋白質(zhì)過程的延伸步驟中與核糖體作用，引起核糖體“反轉(zhuǎn)運”，從而使得翻譯過程中不正確配對的氨基酸退回，糾正錯配。 為了研究果蠅中waw基因的功能，我們構(gòu)建了一個含有突變ATG，并且有移碼突變片段的外源質(zhì)粒pTARG-Δwaw。 通過質(zhì)粒大提的方法獲得用于注
2、射要求的質(zhì)粒，與helper gene一起提純，顯微注射的方法注射到果蠅的卵中，利用同源重組的原理，在果蠅中進行基因打靶，敲除目的基因，又使用了P因子跳出的方法敲除了目的基因。 同時，利用UAS-GAL4系統(tǒng)構(gòu)建了一個用于過表達和一個帶GFP用于定位的質(zhì)粒pUAST-waw，pUAST-waw-GFP，同樣使用顯微注射的方法將提純的質(zhì)粒與helper gene一起注射的果蠅的卵中。 為了研究該基因在體外的功能，我們利用H
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