胃癌中LGR5與Treg細(xì)胞的預(yù)后意義及其作用機(jī)制探索.pdf

1、[目的]
　　多富含亮氨酸重復(fù)單位的G蛋白偶聯(lián)受體5(leucine rich repeat containing Gprotein coupled receptor5，LGR5)是近年來(lái)腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物研究的熱點(diǎn)。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)可分泌多種可溶性因子來(lái)調(diào)節(jié)免疫微環(huán)境，在腫瘤免疫逃避中起重要作用。本實(shí)驗(yàn)的目的是研究胃癌組織中LGR5的表達(dá)和Treg細(xì)胞之間的聯(lián)系，并研究TGF-β蛋白對(duì)胃癌細(xì)胞中LGR5表達(dá)的調(diào)節(jié)作用及其潛

2、在機(jī)制。
　　[方法]
　　本研究采用2009年2月至2010年3月在我院確診的100例胃癌病人石蠟標(biāo)本及2013年5月至2014年5月在我院確診的69例胃癌病人石蠟標(biāo)本及新鮮組織標(biāo)本。通過(guò)免疫組化觀察胃癌組織中LGR5的表達(dá)及Treg細(xì)胞的數(shù)量，并分析與預(yù)后的關(guān)系。運(yùn)用流式微珠陣列(cytometric bead array, CBA)檢測(cè)胃癌組織中Th1/Th2相關(guān)細(xì)胞因子IL-2， IL-4，IL-6，IL-10，TN

3、F以及IFN-γ的表達(dá);運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)胃癌組織中TGF-β的表達(dá)。通過(guò)在胃癌細(xì)胞培養(yǎng)基中加入TGF-β蛋白和TGF-β/ALK5/Smad2信號(hào)通路抑制劑SB431542，觀察胃癌細(xì)胞中LGR5及β-catenin的表達(dá)變化。
　　[結(jié)果]
　　免疫組化結(jié)果顯示，LGR5高表達(dá)組患者生存時(shí)間較LGR5低表達(dá)組明顯縮短（五年總生存率:53％ vs.79％; P=0.0057）;同時(shí)，高Treg細(xì)胞數(shù)組患

4、者生存較低Treg細(xì)胞數(shù)組明顯縮短（五年總生存率:54％vs.76％; P=0.0167）。LGR5高表達(dá)組胃癌組織中Treg細(xì)胞數(shù)（X±SD:12.94±0.8673）相比于LGR5低表達(dá)組（(X)±SD:7.051±0.5915）明顯增高，兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.0001)。LGR5高低表達(dá)兩組間Th1/Th2相關(guān)細(xì)胞因子IL-2， IL-4，IL-6， IL-10，TNF以及IFN-γ表達(dá)并無(wú)明顯差異，而TGF-β1在LGR5高

5、表達(dá)組胃癌組織中的表達(dá)量明顯高于LGR5低表達(dá)組(P＜0.0001)。在胃癌細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，加入外源性TGF-β1蛋白后，LGR5的表達(dá)上調(diào)，同時(shí)，β-catenin的表達(dá)也隨之上調(diào)，而加入TGF-β/ALK5/Smad2信號(hào)通路的特異性拮抗劑SB431542之后，這種上調(diào)效應(yīng)減弱。
　　[結(jié)論]
　　胃癌組織中表達(dá)的LGR5強(qiáng)度可視為一個(gè)潛在的預(yù)后指標(biāo)，并有望成為下一個(gè)胃癌治療的生物靶點(diǎn)，且與Treg細(xì)胞呈一定相關(guān)性，后者