肺炎鏈球菌減毒活疫苗SPY1引起Th17免疫應(yīng)答機(jī)制初步研究.pdf

1、肺炎鏈球菌是一種能夠引起肺炎、中耳炎、腦膜炎和膿毒血癥的主要病原菌之一，對(duì)兒童和老年人的危害尤為突出。接種有效的疫苗是預(yù)防肺炎鏈球菌感染的一種常用措施。在前期研究中，我們獲得了一株2型肺炎鏈球菌減毒株SPY1。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)將其作為活菌疫苗免疫小鼠后，能有效保護(hù)小鼠抵抗肺炎鏈球菌感染，進(jìn)一步的機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)這種免疫保護(hù)作用與Th17型免疫應(yīng)答有關(guān)。然而SPY1引起Th17應(yīng)答的具體機(jī)制并不清楚。
　　抗原提呈細(xì)胞，如樹突狀細(xì)胞（DC）

2、和巨噬細(xì)胞（MФ）在固有免疫應(yīng)答和適應(yīng)性免疫應(yīng)答中都發(fā)揮著極為重要的作用。在本研究中，我們成功培養(yǎng)了小鼠骨髓來源的巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞，將SPY1分別與巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞作用后，觀察其對(duì)這些抗原提呈細(xì)胞免疫應(yīng)答的作用及應(yīng)答的潛在機(jī)制。結(jié)果顯示：SPY1與巨噬細(xì)胞作用后，能夠引起巨噬細(xì)胞產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答，分泌大量TNF-α、IL-6和IL-12等細(xì)胞因子。由于TLR2和TLR4在肺炎鏈球菌引起的免疫應(yīng)答中起重要作用，我們進(jìn)一步利用相應(yīng)

3、缺陷鼠研究了TLR2和TLR4在SPY1引起的巨噬細(xì)胞免疫應(yīng)答中的作用，結(jié)果提示SPY1引起的巨噬細(xì)胞應(yīng)答并不依賴于TLR2和TLR4。SPY1能夠激活巨噬細(xì)胞內(nèi)MAPK、PI3K和NF-κB信號(hào)通路,經(jīng)相應(yīng)抑制劑處理后，SPY1引起的巨噬細(xì)胞應(yīng)答顯著減弱，表明SPY1可通過MAPK、PI3K和NF-κB信號(hào)通路引起巨噬細(xì)胞免疫應(yīng)答。
　　與樹突狀細(xì)胞作用后，我們發(fā)現(xiàn)SPY1能夠有效激活DC，促使其高表達(dá)TNF-α、IL-6、IL

4、-23和IL-12等細(xì)胞因子以及協(xié)同刺激分子CD40、CD86和MHCⅡ,并且能夠活化MAPK和NF-κB信號(hào)通路。與野生菌株D39相比，SPY1激活DC成熟活化的能力顯著強(qiáng)于D39。進(jìn)一步將SPY1活化的DC與小鼠同源異體的CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)，我們發(fā)現(xiàn)SPY1活化的DC能夠有效促進(jìn)Th1和Th17細(xì)胞分化。為進(jìn)一步明確DC的作用，我們將SPY1處理后的DC過繼轉(zhuǎn)移給小鼠后，發(fā)現(xiàn)這種接受了SPY1活化的DC免疫后的小鼠脾細(xì)胞同樣能夠產(chǎn)

5、生顯著的Th1和Th17免疫應(yīng)答，而D39活化的DC產(chǎn)生的Th1和Th17免疫應(yīng)答十分微弱。
　　總之，本研究我們發(fā)現(xiàn)肺炎鏈球菌減毒活疫苗SPY1能夠有效激活巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞，產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答。SPY1引起的巨噬細(xì)胞免疫應(yīng)答不依賴于TLR2和TLR4，但可通過MAPK、PI3K和NF-κB多條信號(hào)通路引起巨噬細(xì)胞免疫應(yīng)答。SPY1通過MAPK和NF-κB通路使DC成熟活化，產(chǎn)生IL-6等細(xì)胞因子和協(xié)同刺激分子，使初始T細(xì)胞極