Let--7c-5p在乳腺癌中的表達(dá)、功能及其分子機(jī)制的研究.pdf

1、乳腺癌是女性最普遍的惡性疾病之一，它的高發(fā)生率及死亡率嚴(yán)重威脅女性身心健康。隨著精準(zhǔn)醫(yī)療的提出，乳腺癌的治療方法將更加多樣化，治療效果也將更加令人滿意。在精準(zhǔn)醫(yī)療中基因工程將發(fā)揮重要作用，所以探究基因在乳腺癌中扮演的角色以及其發(fā)揮作用的分子機(jī)制能夠?yàn)榫珳?zhǔn)醫(yī)療奠定理論基礎(chǔ)。Let-7c-5p是抑癌基因let-7家族中的一員，它在前列腺癌、非小細(xì)胞肺癌以及結(jié)腸癌中都起著一定的抑癌作用，在乳腺癌患者血清中檢測到其表達(dá)量呈明顯下降趨勢，但是le

2、t-7c-5p在乳腺癌中的生物學(xué)功能尚未明了。
　　本研究選取9對(duì)乳腺癌以及相對(duì)應(yīng)癌旁組織的石蠟包埋樣本為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，提取其總RNA后，進(jìn)行RT-qPCR檢測let-7c-5p在乳腺癌及癌旁組織中的表達(dá)情況;同時(shí)在乳腺癌細(xì)胞MCF-7中過表達(dá)let-7c-5p，采用MTT的方法測試let-7c-5p對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖能力的影響，利用流式細(xì)胞儀探測let-7c-5p對(duì)MCF-7細(xì)胞凋亡的影響;然后利用生物信息學(xué)軟件預(yù)測let-7c-

3、5p潛在的靶標(biāo)基因，并用雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)加以驗(yàn)證，再采用熒光定量PCR和Western blotting實(shí)驗(yàn)深入探索其調(diào)控方式。結(jié)果顯示，let-7c-5p在9例乳腺癌組織中的表達(dá)量均低于對(duì)應(yīng)的癌旁組織，其在癌組織中的表達(dá)量約為癌旁組織的0.23。對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7轉(zhuǎn)染let-7c-5pmimics后，細(xì)胞中l(wèi)et-7c-5p表達(dá)量較對(duì)照組顯著升高(P＜0.01)，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的增殖能力受到明顯抑制(P＜0.01)，且抑制效果與let-

4、7c-5p mimics終濃度呈正相關(guān);流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果表明過表達(dá)let-7c-5p后細(xì)胞凋亡率明顯上升(P＜0.01)。生物信息學(xué)軟件預(yù)測ERCC6為let-7c-5p潛在的靶標(biāo)基因，雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)、Western blotting和熒光定量PCR結(jié)果表明let-7c-5p能夠結(jié)合至ERCC6 mRNA的3'UTR，從而抑制ERCC6蛋白的合成，但是ERCC6 mRNA的表達(dá)水平并不受let-7c-5p影響。綜上，本研究結(jié)果表明le