ONECUT2基因沉默抑制卵巢癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和血管新生.pdf

1、目的：ONECUT2(One Cut Homeobox2,OC-2)是一個新發(fā)現(xiàn)的與腫瘤細(xì)胞增殖、血管新生和轉(zhuǎn)移相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，同時，它也與癌細(xì)胞的EMT(Epithelial Mesenchymal Transition,EMT)過程密切相關(guān)。本文目的在于明確OC-2基因在卵巢癌中出現(xiàn)的異常表達(dá)情況，同時，通過siRNA沉默OC-2基因，明確OC-2在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制以及對癌細(xì)胞增殖、遷移和血管新生的影響。
　　方法：

2、采用實時熒光定量PCR的方法，檢測了OC-2在不同卵巢癌細(xì)胞系中的相對表達(dá)情況。收集了10例患者卵巢癌組織及2例正常卵巢組織，用免疫組化的方法檢查OC-2蛋白的表達(dá)情況。CCK-8實驗檢驗siRNA沉默OC-2基因?qū)β殉舶┘?xì)胞增殖的影響。Transwell遷移/侵襲實驗和劃痕實驗檢測siRNA沉默OC-2基因?qū)β殉舶┘?xì)胞遷移和侵襲的影響。構(gòu)建卵巢癌裸鼠模型，檢測siRNA沉默OC-2基因?qū)δ[瘤生長和血管新生的影響。
　　結(jié)果：1.

3、OC-2在卵巢癌細(xì)胞系中存在差異表達(dá)，COV-504和SKOV3細(xì)胞中OC-2基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平很蛋白翻譯水平都較高。檢測的10例患者卵巢癌組織，其中6例出現(xiàn)OC-2陽性表達(dá)，2例正常卵巢組織都呈現(xiàn)OC-2陰性。
　　2.SiRNA對COV-504、SKOV3中OC-2蛋白表達(dá)平均抑制率為85％和86%；CCK-8實驗表明siRNA對COV-504、SKOV3細(xì)胞的增殖的抑制率平均為11%和10%，抑制率隨時間增高，在48h達(dá)到

4、最高；Transwell實驗證明siRNA對COV-504、SKOV3遷移的抑制率平均為74%和76%；劃痕實驗證明siRNA對COV-504、SKOV3遷移的抑制率平均為87%和88%；侵襲實驗證明siRNA對COV-504、SKOV3侵襲的抑制率平均為71%和77%；成管實驗證明siRNA對COV-504、SKOV3誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞成管的抑制率平均為61%和60%；SiRNA對COV-504細(xì)胞p-Akt和p-Erk蛋白的抑制率分別平均

5、為81%和47%，對SKOV3細(xì)胞p-Akt和p-Erk蛋白的抑制率分別平均為91%和95%；用siRNA沉默COV-504細(xì)胞中的OC-2基因?qū)-cadherin的抑制率平均為63%，上調(diào)E-cadherin209%；對SKOV3 N-cadherin的抑制率為14%，上調(diào)E-cadherin268%。
　　3.構(gòu)建的SKOV3細(xì)胞裸鼠模型，siRNA沉默OC-2基因?qū)δ[瘤質(zhì)量和腫瘤組織微血管密度的抑制率分別為93%和78%，

6、腫瘤體積顯著小于同時期陰性對照組。
　　結(jié)論：OC-2基因在不同卵巢癌細(xì)胞株和患者卵巢癌組織中出現(xiàn)差異表達(dá)。CCK-8實驗證明siRNA沉默OC-2基因可以抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖；Transwell實驗和劃痕實驗證明，siRNA沉默OC-2基因抑制卵巢癌細(xì)胞遷移；侵襲實驗和成管實驗結(jié)果表明，OC-2被抑制后，卵巢癌細(xì)胞侵襲和誘導(dǎo)血管新生被顯著抑制；Western Blot實驗證明OC-2可以通過調(diào)節(jié)Akt/Erk信號通路而實現(xiàn)調(diào)控作