miR-124靶作用GMFβ基因調(diào)節(jié)卵巢癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移.pdf

1、目的:本研究旨在探討miR-124是否通過靶向調(diào)控GMFβ基因表達(dá)而抑制卵巢癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移和增殖能力，從而揭示miR-124抑制腫瘤的分子機(jī)制。
　　方法:
　　1、追蹤文獻(xiàn)并運(yùn)用生物信息學(xué)軟件Targetscan確定與卵巢癌關(guān)系密切的miR-124和靶基因GMFβ。
　　2、Realtime RT-PCR檢測(cè)miR-124和GMFβ在侵襲、非侵襲卵巢癌細(xì)胞系中表達(dá)差異。
　　3、Luciference rep

2、ort assay確證靶標(biāo)作用位點(diǎn)。
　　4、轉(zhuǎn)染miR-124表達(dá)載體，Realtime RT-PCR和Western blot檢測(cè)GMFβ基因在mRNA和蛋白質(zhì)水平變化。
　　5、過表達(dá)miR-124后，采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲、MTS測(cè)定細(xì)胞增殖。
　　結(jié)果:
　　1、GM鄧在卵巢癌中高表達(dá)，miR-124在卵巢癌中低表達(dá)，targetScan綜合預(yù)測(cè)GMFβ基因

3、與miR-124有很強(qiáng)的靶作用關(guān)系。
　　2、與卵巢癌細(xì)胞系CAOV3（非侵襲）比較，GMFβ基因在SKOV3（侵襲）中高表達(dá)，相反miR-124低表達(dá)。
　　3、Luciference report assay證實(shí)GMFβ-3'UTR是miR-124的靶作用位點(diǎn)。
　　4、過表達(dá)miR-124后GMFβ基因mRNA水平無明顯變化，蛋白質(zhì)水平降低。
　　5、miRNA的功能分析:
　?、賱澓蹖?shí)驗(yàn):過表達(dá)mi