胚胎肝造血干細(xì)胞分化為樹(shù)突狀細(xì)胞的調(diào)控研究.pdf

1、目的：既往研究發(fā)現(xiàn)，小鼠胚胎肝Lin-c-kit+造血干細(xì)胞在體外能分化為樹(shù)突狀細(xì)胞。其分化所需的培養(yǎng)條件除細(xì)胞因子GM-CSF+SCF+Flt3L+TNFα外，還需要有基質(zhì)細(xì)胞PA6的存在。本研究擬探討在沒(méi)有基質(zhì)細(xì)胞PA6存在的情況下，胚胎肝Lin-c-kit+造血于細(xì)胞能否在體外分化為樹(shù)突狀細(xì)胞，找出決定胚胎肝Lin-c-kit+造血干細(xì)胞向樹(shù)突狀細(xì)胞分化的關(guān)鍵因子，并進(jìn)一步驗(yàn)證其在體內(nèi)分化為樹(shù)突狀細(xì)胞的能力。 方法：采用

2、FACS分離小鼠胚胎肝Lin-c-kit+造血干細(xì)胞，以IMDM培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度為3×104/ml，在細(xì)胞因子組合GM-CSF+SCF+Flt3L的基礎(chǔ)上，單獨(dú)或聯(lián)合加入細(xì)胞因子IL-3、IL-7、IL-15，培養(yǎng)12-14天后，繼續(xù)用GM-CSF+TNFα刺激3-5天。觀察細(xì)胞形態(tài)，收集細(xì)胞后熒光染色流式細(xì)胞儀分析表型，或在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中檢測(cè)刺激異體CD4+T細(xì)胞增殖的能力。接著，分別將B6 Ly5.2小鼠胚胎肝或骨髓來(lái)源的Li

3、n-c-kit+細(xì)胞經(jīng)尾靜脈輸入致死劑量照射的B6 Ly5.1受鼠體內(nèi)，建立造血重建的嵌合鼠模型。在特定的時(shí)間點(diǎn)觀察胚胎肝Lin-c-kit+細(xì)胞在體內(nèi)分化為樹(shù)突狀細(xì)胞的能力，比較其與骨髓細(xì)胞來(lái)源的樹(shù)突狀細(xì)胞在表型及功能上的異同；將中和型抗IL-3或抗IL-7抗體注射入受鼠腹腔，觀察并比較不同因子對(duì)Lin'c-kit+造血干細(xì)胞體內(nèi)分化為樹(shù)突狀細(xì)胞的影響。 結(jié)果：⑴在沒(méi)有基質(zhì)細(xì)胞PA6，僅存在GM-CSF+SCF+Flt3L+

4、TNFα的條件下，IL-3能誘導(dǎo)胚胎肝Lin'c-kit+細(xì)胞分化為樹(shù)突狀細(xì)胞，這些樹(shù)突狀細(xì)胞在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中能刺激初始CD4+T細(xì)胞增殖。IL-7能提高IL-3誘導(dǎo)產(chǎn)生的樹(shù)突狀細(xì)胞數(shù)量，但I(xiàn)L-7或IL-15均不能誘導(dǎo)胚胎肝Lin'c-kit+細(xì)胞分化為樹(shù)突狀細(xì)胞。⑵胚胎肝Lin'c-kit+細(xì)胞輸入致死劑量照射的受鼠后，能夠分化為脾臟DC。這些DC高表達(dá)Ia、CD11c，同時(shí)表達(dá)中等水平的CD40、DEC205、Thy1.2、C

5、D8a；同時(shí)發(fā)現(xiàn)，胚胎肝Lin'c-kit+細(xì)胞能夠在體內(nèi)分化為皮膚郎格罕氏細(xì)胞，這些細(xì)胞表達(dá)E-cadherin、Ia、DEC205和Thy1.2，但僅表達(dá)低水平的CD11c，且不表達(dá)CD8a。無(wú)論是脾臟還是皮膚的樹(shù)突狀細(xì)胞，均能有效刺激T細(xì)胞增殖。中和型抗IL-3抗體能抑制胚胎肝來(lái)源的Lin'c-kit+細(xì)胞向樹(shù)突狀細(xì)胞分化，而中和型抗IL-7抗體則不影響胚胎肝Lin'c-kit+細(xì)胞在體內(nèi)向樹(shù)突狀細(xì)胞分化。 結(jié)論：①胚胎