鱷嘴花特征活性組分對HepA移植瘤小鼠的抗腫瘤機制與安全性評價的研究.pdf

1、惡性腫瘤是世界上發(fā)病率較高的一種疾病，極大地危害人類的健康?，F(xiàn)有的抗腫瘤藥物存在著藥效差、特異性差和毒副作用大等問題。因此，多途徑篩選低毒、高效、特異的藥食兩用抗腫瘤植物資源仍是當前研究的熱點。
　　鱷嘴花（Clinacanthus nutansBurm.f.Lindau）為爵床科鱷嘴花屬植物，又名憂遁草、沙巴蛇草，青箭，廣泛分布在中南半島、馬來半島以及中國大陸的廣西、廣東、云南、海南等地區(qū)，藥食兩用，是民間的一種野菜，主要用于預

2、防和治療惡性腫瘤等。本文以馬來西亞產(chǎn)野生鱷嘴花為主要研究對象，通過分離提純、結構鑒定、體內外抗腫瘤活性評價和免疫激活調節(jié)機制等，較深入系統(tǒng)地研究了其中主要抗腫瘤成分、抑瘤功效機理和食用安全性等問題，為開發(fā)天然安全有效的鱷嘴花抗腫瘤食品或食品保健品奠定基礎。
　　本論文主要研究內容及結論如下：
　　（1）首先以鱷嘴花為原料，采用溶劑法、硅膠柱層析、Sephadex LH-20柱層析及重結晶等方法進行成分分離及純化技術，并利用H

3、PLC-MS、光譜法（1HNMR、13CNMR、HBQC、COSY）、GC-MS、IR和HPLC等分析技術，從正丁醇部位中經(jīng)柱層析與30％乙醇洗脫純化后的部分中鑒定出有抗癌活性功能的6個黃酮碳苷類化合物（葒草苷、異牡荊苷、異葒草苷、牡荊苷、夏佛塔苷和芹菜素）。
　?。?）隨后采用高通量基因芯片表達譜學技術，觀察 CN30治療 HepA移植瘤鼠腫瘤后在基因水平上差異基因的表達狀況。以對CN30藥理功能與抗癌機制進行大面積初篩。結果表

4、明：共有773個基因被差異表達，聚類分析也發(fā)現(xiàn)與腫瘤及免疫調節(jié)有關的差異基因有近500個。其中345個差異基因表達下調（P<0.05）；430個差異基因表達上調（P<0.05）。分析結果發(fā)現(xiàn)：與腫瘤，免疫失調等疾病有關的基因（靶基因）差異表達的有504個；受影響的信號轉導通路主要有有絲分裂、Pi3k-Akt、WnT、p53、P450、核因子κB（NFκB）、Janus激酶、轉錄活化因子（JAK/STAT）和維甲酸等。
　?。?）緊

5、接應用了MTT、免疫印跡分析、免疫熒光組織化學、胞內染色流式分析、酶聯(lián)免疫吸附法、生化指標測定等技術進行試驗驗證。確定了鱷嘴花提取物CN30的體內抗腫瘤機制，研究數(shù)據(jù)表明：鱷嘴花CN30中主要的抗腫瘤小分子活性物質-黃酮碳苷，具有較強的體內抑制移植瘤鼠HepA的增殖作用，可激活CD8+ T細胞，CTL細胞，Th1，Th2和Th17細胞亞群，上調MHC classⅡ，F(xiàn)oxp3，Casp3，Bax，Bad，CD4+，IL-2和IFN-γ蛋

6、白因子的表達；下調Bcl2，Bcl-xl，PI3K和AKT蛋白因子的表達。Western blot還證實了鱷嘴花黃酮碳苷能上調Casp3/Bad和下調了Bcl2/IL4的表達。因此可以認為通過NF-κB信號、細胞遷移、誘導腫瘤細胞凋亡與抗腫瘤細胞增殖是CN30在體內主要的免疫抗腫瘤機制。
　?。?）最后系統(tǒng)評價了鱷嘴花醇提取物的食用安全性。通過喂食試驗鼠不同劑量的鱷嘴花醇提浸膏，觀察其急性毒性、亞慢性毒性和遺傳毒性。結果顯示，急性