藍(lán)莓花青素分析及抗氧化活性研究.pdf

1、花青素，是黃酮類化合物，是廣泛存在于植物中的天然水溶性色素，因主要以糖苷的形式存在，所以也稱花色苷?？蒲薪Y(jié)果顯示:花青素是現(xiàn)今所發(fā)現(xiàn)的最有效的天然水溶性自由基清除劑。隨著研究者對(duì)花青素更加深入的研究，其功效越來越引人矚目，花青素的主要的功效有:①延緩衰老、激活巨噬細(xì)胞，使血清免疫球蛋白免受自由基的侵害;②提高免疫力、降低心腦血管疾病的發(fā)病率;③降低糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)率、改善退行型老年癡呆、保護(hù)基因的完整性;④降低癌癥的發(fā)病率、抗發(fā)

2、炎、預(yù)防視力衰退等諸多功能。
　　藍(lán)莓在我國已實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化栽培，全國有近5萬畝的栽培面積，其中遼南地區(qū)栽培面積近1萬畝;未來幾年，藍(lán)莓果將進(jìn)入豐產(chǎn)期，藍(lán)莓鮮果40％產(chǎn)量作為鮮果食用，60％的藍(lán)莓果需要進(jìn)行深加工。目前，市場上的藍(lán)莓果產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊，沒有地方和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，以藍(lán)莓花青素作為藍(lán)莓果加工產(chǎn)品的質(zhì)量和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)的建立迫在眉睫。藍(lán)莓花青素目前的研究主要集中在分離、純化及結(jié)構(gòu)鑒定上。本論文基于前期開展的花青素高效液相色譜檢測分析，針

3、對(duì)遼南地區(qū)主要栽培品種進(jìn)行花青素成分及含量分析，同時(shí)，對(duì)藍(lán)莓花青素提取物進(jìn)行清除自由基活性評(píng)價(jià)，并在細(xì)胞水平上考察抗氧化活性，建立藍(lán)莓果及產(chǎn)品質(zhì)量及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，得到如下結(jié)論:
　　(1)不同藍(lán)莓品種花青素的含量測定
　　選擇黑珍珠、北青、伯克利、藍(lán)豐4個(gè)藍(lán)莓品種，對(duì)其鮮果進(jìn)行高效液相色譜分析，發(fā)現(xiàn)藍(lán)莓果中主要花青素有13種，這13種花青素在黑珍珠、伯克利、北青、藍(lán)豐中占總花青素的比例分別達(dá)到了89.63％、99.32％、99.

4、04％、98.26％。以這13種花青素作為藍(lán)莓花青素的指紋組分，作為藍(lán)莓花青素定性、定量分析的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn);以矢車菊色素為標(biāo)準(zhǔn)品，測定黑珍珠、北青、伯克利、藍(lán)豐品種果汁花青素，含量分別為8.25、3.35、2.83、2.63mg/g。實(shí)驗(yàn)室制備藍(lán)莓花青素提取物樣品的花青素含量為30.45％。
　　(2)藍(lán)莓花青素清除自由基活性
　　以維生素C(VC)、2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)為對(duì)照，以DPPH自由基、ABTS自由

5、基、超氧陰離子、羥自由基的清除能力、總抗氧化活性和還原力、對(duì)脂質(zhì)過氧化的抑制能力為指標(biāo)，分別考察藍(lán)莓花青素提取物的清除自由基能力;實(shí)驗(yàn)證明，除對(duì)脂質(zhì)過氧化的抑制能力外，藍(lán)莓花青素提取物（花青素含量為30.45％）清除自由基能力與花青素含量成正比，對(duì)DPPH自由基、超氧陰離子、羥自由基的清除能力、總抗氧化能力、總還原力，單位質(zhì)量活性花青素均強(qiáng)于VC，對(duì)ABTS自由基清除能力單位質(zhì)量活性花青素與VC相當(dāng)。對(duì)脂質(zhì)過氧化的抑制能力，脂溶性BHT

6、強(qiáng)于藍(lán)莓花青素和VC。黑珍珠、北青、伯克利、藍(lán)豐4個(gè)品種藍(lán)莓花青素含量與DPPH清除自由基能力呈正相關(guān)。
　　(3)藍(lán)莓花青素細(xì)胞水平抗氧化活性
　　以BGC-823為對(duì)象，通過H2O2添加造成細(xì)胞氧化損傷，分別考察藍(lán)莓花青素提取物、VC和BHT對(duì)損傷細(xì)胞的保護(hù)和恢復(fù)作用，實(shí)驗(yàn)表明藍(lán)莓花青素提取物的保護(hù)作用明顯，并且具有劑量依賴性。藍(lán)莓花青素提取物、VC和BHT對(duì)H2O2損傷后的細(xì)胞均沒有恢復(fù)作用。添加H2O2誘導(dǎo)BGC-8

7、23細(xì)胞ROS增加，而藍(lán)莓花青素的添加可抑制ROS的生成，且有劑量正相關(guān)性;同時(shí)，可提高細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶活性，清除氧自由基。
　　綜上，論文研究確定了13種花青素作為藍(lán)莓花青素指紋鑒定組分，用于HPLC的定性與定量分析。藍(lán)莓花青素清除自由基能力與含量成正比，對(duì)DPPH自由基、超氧陰離子、羥自由基的清除能力、總抗氧化能力、總還原力，單位質(zhì)量活性花青素優(yōu)于VC，而對(duì)ABTS自由基清除能力與VC相當(dāng)。藍(lán)莓花青素在細(xì)胞