α7nAChR在小鼠膿毒癥急性肝損傷的作用及GTS-21干預(yù)研究.pdf

1、背景：膿毒癥即感染引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征（ Systemic inflammatory response syndrome，SIRS）是現(xiàn)代危重病醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)及難點(diǎn)，急性肝損傷是膿毒癥重要并發(fā)癥之一，直接影響其預(yù)后。炎癥細(xì)胞因子風(fēng)暴是膿毒癥急性肝損傷的主要發(fā)病機(jī)制之一。膽堿能抗炎通路（CAP）是膽堿能神經(jīng)及其遞質(zhì)調(diào)節(jié)對抗全身炎癥反應(yīng)的通路，主要通過煙堿型乙酰膽堿受體α7亞基（α7nicotinic acetylcholine r

2、eceptors type，α7nAChR）調(diào)節(jié)炎性因子的產(chǎn)生，對多種炎癥性疾病的發(fā)生、發(fā)展起重要作用，α7nAChR正逐漸成為調(diào)節(jié)炎癥因子產(chǎn)生和膽堿能抗炎效應(yīng)藥理學(xué)的靶標(biāo)，具有“開關(guān)”作用。GTS-21為α7nAChR特異性激動(dòng)劑，在阿爾茨海默氏病和關(guān)節(jié)炎等許多免疫炎癥性疾病中發(fā)揮抗炎保護(hù)作用。目前α7nAChR在膿毒癥急性肝損傷的抗炎機(jī)制及GTS-21對膿毒癥急性肝損傷保護(hù)作用鮮有報(bào)道。
　　目的：觀察α7nAChR及其下游炎

3、癥因子IL-18、IL-1β、HMGB1在LPS誘導(dǎo)的小鼠膿毒癥急性肝損傷模型中的動(dòng)態(tài)表達(dá)，探索α7nAChR在急性膿毒癥肝損傷的發(fā)病機(jī)制；觀察GTS-21對小鼠膿毒癥急性肝損傷模型的保護(hù)作用，為膿毒癥性肝損傷提供新的治療依據(jù)。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)一α7nAChR在LPS誘導(dǎo)的膿毒癥急性肝損傷的發(fā)病機(jī)制研究
　　60只雄性C57BL/6小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對照組(n=10）；急性肝損傷模型組(LPS30mg/k

4、g，n=50），急性肝損傷模型組又分為模型組1h、3h、6h、12h、24h五個(gè)亞組，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，采用LPS30mg/kg腹腔注射造模，造模后1h、3h、6h、12h、24h各點(diǎn)處死存活小鼠；正常對照組腹腔注射等體積LPS助溶劑（生理鹽水），1小時(shí)后處死小鼠。每組選取8個(gè)樣本，檢測正常對照組及小鼠肝臟 HE染色的病理變化、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）水平，采用酶聯(lián)免疫ELISA法檢測肝臟組織IL-18、IL-1β、

5、HMGB1水平，采用Real-Time PCR檢測肝組織α7nAChR表達(dá)水平。
　　實(shí)驗(yàn)二 GTS-21靶向干預(yù)對 LPS誘導(dǎo)的小鼠膿毒癥急性肝損傷的保護(hù)作用
　?。?）40只雄性 C57BL/6小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對照組(n=10）；空白對照組(GTS-213mg/kg，n=10）；模型組(LPS30mg/kg， n=10）；GTS-21干預(yù)組(LPS30mg/kg+GTS-213mg/kg，n=10），適應(yīng)性喂養(yǎng)

6、1周，模型組采用LPS30mg/kg腹腔注射造模，正常對照組予等體積LPS助溶劑（生理鹽水）腹腔注射，空白對照組采用GTS-213mg/kg腹腔注射，不注射LPS，干預(yù)組于造模前（LPS30mg/kg）30min腹腔注射GTS-213mg/kg。于造模后6h處死各組小鼠（各組均無小鼠死亡），每組選取8個(gè)樣本，檢測各組小鼠肝臟HE染色的病理變化情況、血清ALT、AST水平，肝臟組織 IL-18、IL-1β、HMGB含量及α7nAChR表達(dá)

7、水平。
　　（2）30只雄性C57BL/6小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組（n=15）、干預(yù)組（n=15），適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，模型組采用LPS30mg/kg腹腔注射造模，干預(yù)組于造模前（LPS30mg/kg）30min腹腔注射 GTS-213mg/kg。觀察48h內(nèi)各組小鼠的癥狀和生存情況，清點(diǎn)各時(shí)點(diǎn)小鼠的存活數(shù)，繪制生存曲線，進(jìn)行生存分析。
　　結(jié)果：
　　實(shí)驗(yàn)一α7nAChR在LPS誘導(dǎo)的膿毒癥急性肝損傷的發(fā)病機(jī)制研究<

8、br>　　(1)與正常對照組比較，光鏡下模型組各亞組小鼠肝組織均有不同程度病變，其中模型組6h病變最顯著，正常對照組肝臟病理指數(shù)為0，模型組6h為0.57，與其他亞組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。（2）與正常對照組比較，模型組中各亞組小鼠血清AST、ALT水平均增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中模型組6小時(shí)AST(378.37±59.27 vs170.00±55.88P=0.011）,ALT(132.58±45.5

9、3 vs56.93±10.92P=0.002）升高最顯著，相比于模型組其他亞組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。（3）與正常對照組比較，模型組中各亞組肝組織IL-18、HMGB1、IL-1β水平均增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)，其中IL-18（393.83±60.18 vs86.87±10.12）、IL-1β（3988.92±253.25 vs1148.15±66.00）在造模后6h升高最顯著，與其他模型組亞組比較差異均有

10、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而HMGB1（21.30±2.11 vs4.99±1.07）則在造模后12h升高最顯著，相較于模型組其他亞組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。（4）與正常對照組比較，隨著造模時(shí)間的增加，模型組各亞組小鼠肝組織α7nAChR表達(dá)呈逐漸降低趨勢，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　實(shí)驗(yàn)二 GTS-21靶向干預(yù)對LPS誘導(dǎo)的小鼠膿毒癥急性肝損傷的保護(hù)作用
　?。?）與正常對照組比較，光鏡下模型組

11、肝組織可見大量炎癥細(xì)胞浸潤及細(xì)胞壞死，病理改變顯著；與模型組比較，干預(yù)組肝組織病理變化明顯改善，正常對照組肝臟病理指數(shù)為0，干預(yù)組較模型組為（0.21±0.16 vs0.57±0.00），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。（2）與正常對照組比較，模型組AST(378.37±59.27 vs170.00±55.88 P=0.011）,ALT(132.58±45.53vs56.93±10.92P=0.002）明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<

12、0.05)；與模型組相比，干預(yù)組小鼠血清AST(222.51±72.17 VS378.37±59.27P=0.011)、ALT（61.12±19.25 VS132.58±45.53P=0.011)明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。（3）與正常對照組比較，模型組肝組織IL-18、HMGB1、IL-1β水平均升高，IL-18（393.83±60.18 vs86.87±10.12）、HMGB1（13.22±1.88 vs4.99±1

13、.07）、IL-1β（3988.92±253.25 vs1148.15±66.00），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與模型組相比，干預(yù)組肝組織IL-18（132.05±22.23 VS393.83±60.18P=0.02)、IL-1β(1625.08±120.38 VS3988.92±253.25P=0.011)、HMGB1(7.73±1.75 VS21.30±2.11P=0.022)水平明顯下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05

14、)。（4）與正常對照組比較，模型組小鼠肝組織α7nAChR表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而干預(yù)組肝組織α7nAChR表達(dá)較模型組明顯升高（2.11±0.26 VS1.11±0.11），差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。（5）模型組小鼠生存率為53.3％， 干預(yù)組為93.3%，干預(yù)后小鼠生存率明顯改善，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.01)。
　　結(jié)論：（1）α7nAChR在小鼠膿毒癥急性肝損傷模型發(fā)病機(jī)制中起