脂多糖在眼眶成纖維細(xì)胞異常增殖中的作用和機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的:
　　通過利用脂多糖(LPS)刺激體外培養(yǎng)的表型為CD90+及CD90-的甲狀腺相關(guān)眼病(TAO)患者的眼眶成纖維細(xì)胞，比較相同濃度的脂多糖對(duì)不同CD90表型的眼眶成纖維細(xì)胞增殖情況的影響以及其炎性因子表達(dá)的作用，初步探討LPS在甲狀腺相關(guān)眼病中引起脂肪增殖中的機(jī)制。
　　方法:
　　(1)原代培養(yǎng)6例TAO患者的脂肪/結(jié)締組織來源的眼眶成纖維細(xì)胞，隨機(jī)分成7組，分別采用0 ng/ml，50 ng/ml，100

2、ng/ml，200 ng/ml，500 ng/ml,1000 ng/ml,2000 ng/ml LPS進(jìn)行刺激。CCK-8(cell counting kit-8)試劑盒檢測各組眼眶成纖維細(xì)胞增殖情況，探索最佳刺激濃度;
　　(2)利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分選，篩選出CD90-成纖維細(xì)胞;
　　(3)構(gòu)建CD90過表達(dá)慢病毒，轉(zhuǎn)染CD90-細(xì)胞;將細(xì)胞分為A（空白病毒）、B（CD90過表達(dá)病毒）兩組，每組用摸索得到的最佳LPS濃度

3、進(jìn)行刺激。CCK-8試劑盒檢測各組眼眶成纖維細(xì)胞增殖情況;逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法(Reverse transcriptionpolymerase chain reaction，RT-PCR)、Western-blot法檢測各組CD90基因及蛋白的表達(dá)，并使用RT-PCR檢測各組IL-6、IL-1及TNF-α的表達(dá)量。
　　結(jié)果:
　　(1)TAO患者眼眶成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)成功，成功分選出表型為CD90-的眼眶成纖維細(xì)胞，在LP

4、S濃度為500 ng/ml時(shí)，成纖維細(xì)胞增殖20％，為最佳刺激濃度。
　　(2)成功制備過表達(dá)CD90的慢病毒，并轉(zhuǎn)染CD90-眼眶成纖維細(xì)胞。
　　(3)以500 ng/ml LPS刺激眼眶成纖維細(xì)胞后，對(duì)照組及CD90過表達(dá)組間的細(xì)胞增殖沒有明顯變化;同等濃度LPS刺激CD90-眼眶成纖維細(xì)胞后，IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌增多，CD90過表達(dá)組眼眶成纖維細(xì)胞IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌減弱，有統(tǒng)計(jì)學(xué)