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1、目的:體外構(gòu)建重組質(zhì)粒pEGFP-N1-apoJ,轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,并檢測(cè)其在大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá),探索最優(yōu)轉(zhuǎn)染條件。
方法:體外培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-apoJ,探索最優(yōu)轉(zhuǎn)染條件,確定轉(zhuǎn)染效率,并通過Real-time PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)法、Western Blot法檢測(cè)載脂蛋白J(apoJ)的表達(dá)。
結(jié)果:轉(zhuǎn)染后大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中綠色熒光蛋白得到表達(dá),脂質(zhì)體
2、5 ul與重組質(zhì)粒2.0 ug形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物進(jìn)行轉(zhuǎn)染后72小時(shí)轉(zhuǎn)染效率為35%。利用Real-time PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)法和western blot法檢測(cè)證實(shí)了重組質(zhì)粒pEGFP-N1-apoJ攜帶的外源性aopJ在大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)。
結(jié)論:利用脂質(zhì)體介導(dǎo)重組質(zhì)粒pEGFP-N1-apoJ成功轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的BMSCs,脂質(zhì)體LipofectamineTM20005 ul與重組質(zhì)粒pEGFP-N1-apoJ2.0
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