2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、本研究構建了斑點叉尾鮰傳統(tǒng)DNA疫苗和“自殺性”DNA疫苗,鑒定檢測了兩者在細胞中的表達差異,并對兩種疫苗的免疫效果進行了比較。
   1.斑點叉尾鮰病毒(Channel CatfishVirus,CCV)“自殺性”DNA疫苗的構建根據(jù)斑點叉尾鮰病毒(CCV)ORF6基因序列,設計合適的引物,擴增ORF6基因,分別將其克隆到“自殺性”DNA疫苗載體pSFV與常規(guī)DNA疫苗載體pcDNA3.1中,轉化大腸桿菌DH5α后提取質粒,構

2、建“自殺性”DNA疫苗ps-ORF6與常規(guī)DNA疫苗pcd-ORF6,利用轉化后的大腸桿菌菌液為模板進行PCR擴增、提取質粒酶切以及序列測定等方法證實重組質粒構建正確。
   2.CCV ORF6基因在細胞中的表達將待驗證的表達CCV ORF6基因的“自殺性”DNA疫苗和常規(guī)DNA疫苗重組質粒分別轉染293T細胞(人胚腎細胞),間接免疫熒光試驗表明ORF6基因在細胞中均獲得表達,但“自殺性”DNA疫苗表達載體的表達量顯著低于常規(guī)

3、DNA疫苗表達載體。
   3.CCV“自殺性”DNA疫苗對斑點叉尾鮰免疫指標的影響用構建的“自殺性”DNA疫苗ps-ORF6(Ⅲ組)與常規(guī)DNA疫苗pcd-ORF6(Ⅳ組)兩種質粒制作的疫苗及對照的另外三種免疫劑(Ⅰ組為“自殺性”空載體pSFV制成、Ⅱ組為常規(guī)載體pcDNA3.1(+)制成、Ⅴ組為緩沖液PBS)免疫80±10g的斑點叉尾鮰,分別在第0周、第2周、第4周、第6周、第8周等不同時間取血檢測血液白細胞吞噬活性、血清溶

4、菌酶活性、血液總蛋白含量等指標。實驗結果與分析如下:(1)CCV“自殺性”DNA疫苗引起的白細胞吞噬活性較對照組有顯著性差異(P<0.05),均高于其它對照組。表明CCV“自殺性”DNA疫苗能夠更好地增強魚體白細胞吞噬活性,增強免疫力。本實驗結果也表明,影響斑點叉尾鮰白細胞吞噬活性的因素較多,實驗各組都有所增強。(2)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組血清溶菌酶含量比V組高,其中Ⅲ組和Ⅳ組顯著高于其它組別(P<0.05),同時,Ⅲ組顯著高于Ⅳ組(P<0.

5、05)。表明CCV“自殺性”DNA疫苗能夠有效地提高斑點叉尾鮰血清溶菌酶含量。(3)各實驗組均能引起斑點叉尾鮰血清蛋白含量的增加,但是從組間存在顯著性差異來看,CCV“自殺性”DNA疫苗相對其它組沒有明顯的優(yōu)勢,其結果可能受到外界的影響與免疫試劑的影響有交叉共同作用。
   4.CCV“自殺性”DNA疫苗對生長的影響。
   統(tǒng)計免疫后各組斑點叉尾鮰的生長情況,發(fā)現(xiàn)各組生長情況良好,組間差異不顯著,表明各組免疫劑對斑點叉

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