LOC401296分子相互作用蛋白的篩選和鑒定.pdf

1、目的：采用酵母雙雜交系統(tǒng)，尋找與 LOC401296存在相互作用的蛋白，通過(guò)對(duì)相互作用蛋白的分析，以進(jìn)一步了解LOC401296的功能。
　　方法：1、采用酵母雙雜交的方法篩選 LOC401296的相互作用蛋白。首先構(gòu)建pDBLeu-loc融合表達(dá)載體，再將pDBLeu-loc轉(zhuǎn)入MaV203酵母菌株，并進(jìn)行毒性和自激活檢測(cè)；然后篩選成人肝 cDNA文庫(kù)，進(jìn)行陽(yáng)性克隆三報(bào)告基因表型鑒定；最后陽(yáng)性克隆回轉(zhuǎn)驗(yàn)證，排除假陽(yáng)性克隆。生物信

2、息學(xué)分析篩選到的陽(yáng)性克隆。2、采用細(xì)胞免疫熒光方法聯(lián)合激光共聚焦技術(shù)觀察 LOC401296與相互作用蛋白在HEK293細(xì)胞中的共定位。
　　結(jié)果：1、通過(guò)酵母雙雜交技術(shù)篩選出了LOC401296相互作用蛋白。成功構(gòu)建pDBLeu-loc融合表達(dá)載體，并對(duì)篩選到的陽(yáng)性克隆回轉(zhuǎn)驗(yàn)證。將得到的陽(yáng)性基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析共得到8個(gè)陽(yáng)性克隆。2、成功構(gòu)建 pEGFP-GRN、pEGFP-PLSCR1、pEGFP-N4BP2L2三個(gè)融合表達(dá)

3、載體。采用細(xì)胞免疫熒光方法聯(lián)合激光共聚焦技術(shù)觀察LOC401296分別與GRN、PLSCR1、N4BP2L2在HEK293細(xì)胞中共定位情況，發(fā)現(xiàn)LOC401296與3個(gè)相互作用蛋白均存在共定位。
　　結(jié)論：1、通過(guò)酵母雙雜交技術(shù)篩選 LOC401296的相互作用蛋白，共篩選出8個(gè)陽(yáng)性克隆，分別為 GRN、PLSCR1、N4BP2L2、FN1、NOTCH3、LTBP3、ADAMTS-L4、EGFL7，這些基因各具功能，這表明了LOC