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文檔簡介
1、本研究利用易錯PCR技術(shù)對擴展青霉脂肪酶PEL進行定向進化。以擴展青酶脂肪酶基因為模板,通過易錯PCR和轉(zhuǎn)化畢赤酵母建立了約含13000個突變株的突變體庫；通過酶活性的平板透明圈高通量的篩選獲得了約50株的有活性的轉(zhuǎn)化子；通過酶學(xué)特性分析和基因克隆測序,篩選出如下熱穩(wěn)定性和酶活有所改變的突變體。
(1)突變體GS-pPIC3.5K-lip07-ER04,其最適作用溫度比野生型提高10℃,在最適作用溫度下的酶活提高了約22％
2、,Tm值比野生型提高了3.28℃。
(2)突變體GS-pPIC3.5K-lip07-ER10最適作用溫度比野生型提高了5℃,在最適作用溫度下的酶活為950U/mL,Tm值比野生型提高了2.15℃。
(3)突變體GS-pPIC3.5K-lip07-ER15的最適作用溫度沒有發(fā)生變化,在最適作用溫度下的酶活為935U/mL,Tm值比野生型提高了2.28℃。
(4)突變體GS-pPIC3.5K-lip
3、07-ER17最適作用溫度比野生型提高了5℃,在最適作用溫度下的酶活為1005U/mL,Tm值比野生型提高了1.8℃。
(5)突變體GS-pPIC3.5K-lip07-ER31最適作用溫度比野生型提高了5℃,在最適作用溫度下的酶活為917U/mL,Tm值比野生型提高了2.25℃。
(6)突變體GS-pPIC3.5K-Lip07-ER38的最適作用溫度沒有發(fā)生變化,在最適作用溫度下的酶活為1105U/mL,Tm
4、值比野生型提高了2.81℃。
(7)突變體GS-pPIC3.5K-lip07-ER45的最適作用溫度未發(fā)生變化,在最適作用溫度下的酶活為1060U/mL,Tm值比野生型提高了2.26℃。
(8)突變體GS-pPIC3.5K-lip07-ER50的最適作用溫度未發(fā)生變化,在最適作用溫度下的酶活為425U/mL,降低了約42％,Tm值40.4℃。
(9)突變體:HR1、HR2、HR5的最適溫度最適作
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