射陽(yáng)鹽場(chǎng)地區(qū)鯽源嗜水氣單胞菌分子流行病學(xué)研究.pdf

1、細(xì)菌性敗血癥是銀鯽的主要病害之一，此病流行時(shí)間長(zhǎng)、流行地域廣、危害性大，給銀鯽養(yǎng)殖戶帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本研究于2009年5月至2010年10月間對(duì)射陽(yáng)鹽場(chǎng)地區(qū)銀鯽細(xì)菌性敗血癥的流行情況進(jìn)行了調(diào)查，并對(duì)病原菌進(jìn)行了分離鑒定，通過(guò)分子生物學(xué)方法對(duì)其進(jìn)行基因分型，研究其與菌株致病能力及抗原性的關(guān)系，以期為銀鯽細(xì)菌性敗血癥防控措施的制定奠定基礎(chǔ)。本研究主要分為以下4個(gè)部分。
　　 1射陽(yáng)鹽場(chǎng)地區(qū)銀鯽細(xì)菌性敗血癥流行病學(xué)調(diào)查及病原菌分

2、離鑒定
　　 2009年5月-2010年10月對(duì)射陽(yáng)地區(qū)銀鯽細(xì)菌性敗血癥于20℃-34℃開始流行，29℃～33℃為發(fā)病高峰，主要危害0.2-0.4kg的當(dāng)年魚種及咸魚，分慢性型與急性型兩種發(fā)病類型，水體中水溫、溶氧的變化及較高的亞硝酸鹽含量會(huì)使疾病病情惡化；從自然患病魚體上共分離了17株病原菌，鑒定均為致病性嗜水氣單胞菌；17株病原菌生化表型、致病性間存在差異。17株病原菌耐藥性嚴(yán)重，對(duì)阿莫西林、多西環(huán)素、氟苯尼考、土霉素等藥物

3、完全耐藥；對(duì)左氟沙星、恩諾沙星、羅紅霉素、新霉素、慶大霉素、復(fù)方新諾明、磺胺二甲嘧啶、多粘菌素等藥物不同程度耐藥。
　　 2鯽源嗜水氣單胞菌的ERIC-PCR分型方法建立及應(yīng)用
　　 本實(shí)驗(yàn)建立了一套嗜水氣單胞菌ERIC-PCR分子分型方法，并對(duì)PCR體系、反應(yīng)條件等關(guān)鍵點(diǎn)進(jìn)行了優(yōu)化，該方法穩(wěn)定性好、可有效區(qū)分菌株遺傳學(xué)背景的差異，適用于嗜水氣單胞菌分子流行病學(xué)研究；用所建立的方法對(duì)2009-2010年射陽(yáng)地區(qū)分離的17

4、株致病性嗜水氣單胞菌分離株及7株本實(shí)驗(yàn)室保藏的分離與其他地區(qū)的嗜水氣單胞菌進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，24株鯽源嗜水氣單胞菌可聚為3類，分別用A、B、C型表示。其中14株射陽(yáng)地區(qū)分離株與江西株S2、浙江株BSK-10、廣東株S3及80916同為B型，其余3株分離株基因型與浙江株H-1同為A型，說(shuō)明射陽(yáng)地區(qū)與這些地區(qū)可能存有致病性嗜水氣單胞菌輸出或輸入現(xiàn)象；本研究還發(fā)現(xiàn)，從同一病例中分離的多株致病性嗜水氣單胞菌株基因型存在差異，從同一發(fā)病池塘不同時(shí)間發(fā)

5、病病例中分離的致病性嗜水氣單胞菌株基因型間存在差異。
　　 3鯽源嗜水氣單胞菌毒力因子分布及其與基因型的關(guān)系
　　 本實(shí)驗(yàn)建立了一套致病性嗜水氣單胞菌5個(gè)主要毒力基因多重PCR檢測(cè)方法，并對(duì)PCR體系、反應(yīng)條件等關(guān)鍵點(diǎn)進(jìn)行了優(yōu)化，該方法特異性強(qiáng)、敏感性高、反應(yīng)結(jié)果清晰且易判斷，適用于大量樣本的快速檢測(cè)。用所建立的方法對(duì)2009-2010年射陽(yáng)地區(qū)分離的17株致病性嗜水氣單胞菌進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，不同菌株間5種毒力基因的攜帶情況

6、存有差異，毒力基因型為aer+hly+alt+ahp+act+的菌株最多。此外，本研究發(fā)現(xiàn)菌株致病力與菌株毒力基因攜帶情況存在聯(lián)系，毒力基因組成為aer+hly+alt+ahp+act+菌株毒力高于毒力基因缺失株，可能是急性型細(xì)菌性敗血癥的致病株，而毒力缺失株可能會(huì)導(dǎo)致慢性型的細(xì)菌性敗血癥；17株鯽源致病性嗜水氣單胞菌分離株的致病力及毒力基因攜帶情況與ERIC-PCR基因型存有一定的關(guān)系，毒力基因型aer+hly+alt+ahp+act

7、+的嗜水氣單胞菌分離株ERIC-PCR基因型均為B型具有急性毒性，ERIC-PCR基因型為A型的嗜水氣單胞菌分離株的5個(gè)毒力基因均有不同程度的缺失，毒性較弱。這表明B型嗜水氣單胞菌多可能為強(qiáng)毒株，有必要加強(qiáng)對(duì)此類菌株的監(jiān)測(cè)及防控，避免此類強(qiáng)毒株在大范圍內(nèi)流行。
　　 4鯽源嗜水氣單胞菌抗原性及其與基因型的關(guān)系
　　 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究17株鯽源嗜水氣單胞菌的ERIC-PCR基因型與免疫原性進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)各菌株對(duì)同種基因型菌株