基于NMR代謝組學(xué)方法研究腦脈通治療腦缺血-再灌注模型的分子機(jī)理.pdf

1、目的：中藥效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)是闡明中藥作用奧秘和制定科學(xué)質(zhì)量控制指標(biāo)的關(guān)鍵。腦中風(fēng)是危害人類健康的三大疾病之一，病因病機(jī)復(fù)雜，復(fù)方腦脈通是治療腦中風(fēng)的臨床經(jīng)驗(yàn)有效方，但其治療作用機(jī)制和物質(zhì)基礎(chǔ)尚未明確。近年來(lái)體現(xiàn)系統(tǒng)生物學(xué)思想的代謝組學(xué)方法已被廣泛用于藥理和毒理研究，能夠從整體上研究藥物治療效果和作用機(jī)制。本課題的實(shí)施不僅可揭示腦脈通的物質(zhì)基礎(chǔ)，而且為建立基于整體觀、符合中醫(yī)藥特點(diǎn)的復(fù)方中藥物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供新的方法與思路。
　　方法：(

2、1)本實(shí)驗(yàn)擬采用基于NMR的代謝組學(xué)方法和PCA多變量模式識(shí)別技術(shù)，對(duì)正常組、腦梗死模型組、尼莫地平陽(yáng)性藥對(duì)照組(6 mg/kg)和腦脈通低、中、高組(0.15、0.3、0.6 g/kg)、腦脈通有效部位組(0.3 g/kg)大鼠給予復(fù)方腦脈通提取物后，血漿和尿液進(jìn)行代謝組學(xué)研究，分析腦脈通治療后對(duì)各代謝網(wǎng)絡(luò)的干預(yù)及相應(yīng)的標(biāo)志性代謝物變化；(2)同時(shí)進(jìn)行HE染色和TTC染色病理指標(biāo)檢測(cè)，直觀觀察各組在細(xì)胞水平的病理變化，進(jìn)而闡明腦脈通藥

3、效與病理之間的關(guān)系。
　　結(jié)果：(1) PCA和方差結(jié)果顯示，復(fù)方腦脈通中劑量能夠很好地抑制MCAO引起的大鼠血漿中谷氨酰胺、牛磺酸、酪氨酸、乳酸升高；提高脂類、膽固醇、3-羥基丁酸、N-乙酰天門(mén)冬氨酸、乙酰乙酸、膽堿的水平，使之趨向于正常。復(fù)方腦脈通中劑量組和有效部位組通能夠抑制大鼠 MCAO引起的尿液中蘇氨酸、甘氨酸、胡蘆巴堿、丙三醇、谷氨酰胺、N-甲煙堿酸、瓜氨酸、?；撬岬纳?，能提升肌酸酐、肌酸、N-乙酰-（S-3-羥丁基

4、）-L-半胱氨酸、2-羥基丙酮的含量，使之趨向于正常。(2) HE染色結(jié)果顯示腦脈通中劑量組和有效部位組細(xì)胞外間隙較小，神經(jīng)胞漿、核膜相對(duì)清晰，多數(shù)神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)較完整，形態(tài)相對(duì)正常，細(xì)胞及間質(zhì)水腫的病理改變較模型組明顯減輕，接近假手術(shù)組。TTC染色結(jié)果顯示模型組梗死面積較其他組是最大的，給藥組都有不同程度改善，其中中劑量組和有效部位組梗死面積相對(duì)較小。梗死面積方差分析，假手術(shù)組和模型組具有極顯著性差異(P<0.001)，中劑量組