缺氧-復(fù)氧對(duì)大鼠VSMC myocardin基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究短期缺氧/復(fù)氧對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞myocardin基因表達(dá)的影響。 方法：無(wú)菌條件下取出大鼠胸主動(dòng)脈,留取中膜,運(yùn)用組織貼塊法培養(yǎng),采用第4-7代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)前用含1％血清的DMEM培養(yǎng)基靜止細(xì)胞24小時(shí)。自制缺氧裝置,檢測(cè)其缺氧效果,建立體外細(xì)胞缺氧方案,通過(guò)觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化、死亡細(xì)胞記數(shù)等,判斷缺氧刺激對(duì)體外培養(yǎng)平滑肌細(xì)胞活性的影響。提取細(xì)胞總RNA,用RT-PCR法,以α-Actin為內(nèi)對(duì)照,研究平滑肌

2、細(xì)胞在缺氧及復(fù)氧后不同時(shí)間段myocardin mRNA的表達(dá)變化。 結(jié)果： 1、運(yùn)用組織貼塊法成功培養(yǎng)原代細(xì)胞,培養(yǎng)細(xì)胞呈典型的‘峰谷’樣生長(zhǎng),可滿足實(shí)驗(yàn)的需要。 2、自制缺氧裝置24小時(shí)內(nèi)氧分壓明顯降低且PH值波動(dòng)不明顯。對(duì)體外細(xì)胞實(shí)施缺氧氧方案后,24小時(shí)內(nèi)未見明顯細(xì)胞腫大、漂浮和壞死現(xiàn)象。 3、RT-PCR結(jié)果表明與正常對(duì)照組相比,平滑肌細(xì)胞myocardin mRNA表達(dá)在缺氧后逐漸降低(P<0