基于自身紅細胞構(gòu)建的溶血系統(tǒng)檢測總補體活性及其與MICA基因多態(tài)性的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　本文在CH50溶血法的基礎(chǔ)上，以人紅細胞替代綿羊紅細胞，將多管法轉(zhuǎn)化為單管法，創(chuàng)建一種操作簡單，穩(wěn)定可靠的檢測血漿補體總活性的新方法。同時本文應(yīng)用該法檢測ICU患者，冠心病患者，健康體檢者的血漿補體總活性，并在分子水平上研究了冠心病患者補體活性與MICA*008基因攜帶的關(guān)系。
　　方法:
　　1.首先以綿羊紅細胞替代人紅細胞，兔抗人紅細胞抗體替代兔抗羊紅細胞抗體（溶血素）進行溶血試驗，證明不同紅細胞濃度和

2、血漿濃度對紅細胞破壞后釋放血紅蛋白效能的影響。并通過CH50多管法溶血試驗確定發(fā)生溶血反應(yīng)的各種試劑的最適濃度，創(chuàng)建單管溶血比色法。同時通過線性研究和重復試驗驗證了該法的準確度和穩(wěn)定性。
　　2.使用CH50標準法檢測血漿和血清中的補體活性，并使用單管溶血比色法檢測以不同人紅細胞作為溶血指示系統(tǒng)的同一份血漿中的補體活性，進一步驗證單管溶血比色法的可行性。
　　3.使用CH50法和單管溶血比色法檢測同一份血漿的補體活性，驗證兩

3、種方法的相關(guān)性。
　　4.使用單管溶血比色試驗檢測ICU患者，冠心病患者和健康體檢者的補體總活性，證明該方法有一定的臨床應(yīng)用價值。同時采用PCR技術(shù)檢測冠心病患者和健康者的MICA*008基因攜帶情況，分析冠心病患者補體活性與MICA*008基因的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1.本文應(yīng)用人紅細胞和兔抗人紅細胞抗體替代綿羊紅細胞和溶血素進行溶血試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同濃度的紅細胞對溶血程度的影響低于不同濃度的血漿對溶血程度的影響，

4、同時，本文得出當血漿濃度為20％時，紅細胞濃度的不同對紅細胞破壞后釋放血紅蛋白的效能影響最低。因此本文將20％紅細胞懸液所對應(yīng)第九管（20％血漿濃度）中各成分的含量，作為單管溶血比色法中各成分比例的參考。本文應(yīng)用單管溶血比色法檢測不同濃度血漿的補體活性，并連續(xù)5天測定同一份血漿的補體活性，結(jié)果證明不同濃度血漿的補體總活性呈線性分布，連續(xù)5天所測定的補體活性值的變異系數(shù)CV=11.3％，說明單管溶血比色試驗具有一定的準確性和穩(wěn)定性。

5、>　　2.通過CH50標準法檢測血漿和血清中的補體活性，本文得出血漿和血清中的補體活性完全相同，因此可以使用血漿替代血清標本進行補體活性測定，補體檢測技術(shù)得到了優(yōu)化。同時，通過不同人紅細胞作為溶血指示系統(tǒng)檢測同一份血漿中的補體活性，本文得出血漿中的補體活性大致相同(P＞0.05)，說明不同紅細胞不會影響血漿中的補體含量，單管溶血法具有可行性。
　　3.該方法中測定的溶血OD值與CH50溶血法所測的補體活性值兩者呈線性相關(guān)，說明單管

6、溶血比色法與CH50法具有顯著的相關(guān)關(guān)系，單管溶血比色法可以替代CH50溶血法檢測補體總活性。
　　4.ICU患者和冠心病患者的補體活性要顯著低于健康體檢者的補體活性，單管溶血比色法有一定的臨床應(yīng)用價值。冠心病患者和健康體檢者的MICA*008基因分布大致相同，同時冠心病患者的補體水平與MICA*008的攜帶沒有顯著關(guān)聯(lián)。
　　結(jié)論:
　　1.單管溶血法檢測補體活性具有良好的準確性，穩(wěn)定性和可行性，并且與CH50法具有